大鼠外周血内皮祖细胞培养与鉴定的实验-研究

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1、符号说明缩略语CKDEPCsPTCVEGFbFGFFBSSDF．1MNCsPBSFNODDMSoDAB英文cllromckidneydiseaseendothelialprogenitorcellsperitubularcapillaryvascularendothelialgrowthfactorbasicfibroblastgrowthfactorfetalbovineserBmstromalderivedfactor-1mononuclearcellsphosphatebuffersalinefibronectinopticaldensitydimethylsulfoxidediam

2、inobenzidine中文慢性肾脏病内皮祖细胞肾间质微血管血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子胎牛血清间质细胞衍生因子．1单个核细胞磷酸盐缓冲液纤维连接蛋白光密度二甲基亚砜二氨基联苯胺大鼠外周血内皮祖细胞分离及鉴定的实验研究研究生郑莉萍导师王华副教授郑州大学第一附属医院儿内科河南郑州4500521引言慢性肾脏病(cllromckidneydisease，CKD)患者大约占世界总人121的10％【2l，近年来慢性肾脏病的发病人数也在不断增加，据国外报道已达到每年增]J117％以上【31，成为严重威胁人类生命健康的疾病之一。而肾间质纤维化(renalinterstitialfibrosis

3、)基本上是各种进行性肾脏疾病的共同末端通路【4’5】，所以，积极寻找有效干预肾间质纤维化进展的方法将对慢性肾脏疾病的治疗产生重大和积极的意义。近年来，国内外学者逐渐开始重视肾间质微血管(peritubularcapillary,PTC)病变在肾间质纤维化进程中的作用。因为肾间质微血管的减少无疑会导致局部肾组织的缺血缺氧，而缺氧正是通向终末期肾病的重要病因【6】。研究r7】发现，在肾间质纤维化病理改变不严重的时候，肾问质微血管密度的减少就已经存在，在肾间质纤维化的过程中持续存在并与其相互作用，还可以通过缺氧性损伤和转化生长因子．p(transforminggrowthfactor-J3，TG

4、F—p)参与肾间质纤维化的进展。总之，肾间质微血管不仅是炎症、代谢等多种损害因素的承受者，也是造成肾脏损伤的直接参与者。预防肾脏病变持续进展的关键问题之一就是维持肾脏微血管功能与数目【8．91。通过促进内皮细胞修复，可以减少肾间质毛细血管的进行性丢失，从而达到延缓肾间质纤维化及慢性肾脏病进展的目的。对于肾间质纤维化的治疗，既往大多集中于抗炎、抗凋亡、抗氧化、抗细胞因子等方面的研究[10-13I。现今在促进受损血管修复方面，EPCs的应用已经受到了越来越多学者的关注。干细胞能自我更新并能定向分化【141，而EPCs可以经大鼠外周血内皮祖细胞分离及鉴定的实验研究诱导分化为成熟血管内皮细胞。As

5、ahara[”l首次证明出生前后外周血循环中存在能够分化为血管内皮细胞的前体细胞，又称内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)，在胚胎发育期参与胎儿的血管发育。近年进一步研究发现成年个体内也存在EPCs，主要分布于骨髓，在外周血的数量较少，而且一样可以参与出生后的血管新生，在缺血、创伤、低氧等因素或某些细胞因子的动员下，骨髓源性的EPCs可以释放至外周血循环，定向迁移至缺血组织，并增殖分化为成熟血管内皮细胞，参与局部血管新生或血管重塑[16,17]，从而修复组织。研究发现多种疾病都存在EPCs的功能障碍，如糖尿病、心血管疾病、慢性肾病、系统性红斑狼疮等[

6、1s-221。促进有效血管新生或受损血管修复的两个关键条件是：一，有足够数量的EPCs，二，供EPCs发挥作用的适当微环境。在稳定的造血状态下，外周血循环和骨髓源性EPCs数目均较少。而当机体遇到应激、损伤等情况时，外周血循环中的EPCs数量可以显著增多，但是这种刺激作用往往较弱，严重损伤时不能满足机体修复的需要。因此目前的研究多是在体外分离EPCs并培养扩增后再进行体内移植。有学者将辛伐他汀和EPCs共同移植作用于无胸腺裸鼠，结果发现后肢缺血裸鼠模型的血管发生相对对照组明显增强【2”，考虑EPCs通过改善供血促进肢体组织修复。也有人采用大鼠模型将EPCs移植用于治疗慢性肝损伤，结果发现对

7、抑制肝脏纤维化有较好效果，而且促进肝再生的细胞因子如TGF．a、VEGF也明显上升【2引。越来越多的证据表明，循环中的EPCs能够迁移至缺血组织，继而分化为成熟的内皮细胞，促进血管发生或血管修复[25,261。同时，多种因素都会影响EPCs的数量和功能，例如：高血压、血管紧张素、氧化性低密度脂蛋白[27-30]等。有学者进行研究认为EPCs自身还可以分泌VEGF，促进血管新生过程【311，对损伤组织新生血管的形成发挥有利