粪肠球菌cms-h001预防hp感染的分析

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1、七年制硕士论文第一章材料与方法1．1实验材料；第一章材料与方法1．1．1动物6～8周龄SPF级蒙古沙鼠，雌雄各半，体重604-lOg，共60只，购自上海生物制品研究所，24"C恒温恒湿，12小时光照和12小时暗室清洁级动物饲养环境，沙鼠由湘雅二医院动物实验中心饲养1．1．2菌株2．1幽门螺杆菌标准株ATCC43504：由南方医院消化科惠赠。2．2治疗用粪肠球菌CMS—H001为本实验室从健康人胃液中分离，粪肠球菌CMS-H001株保存于中国典型微生物保存中心(武汉)，典藏号CCTCCM206108。1

2、．1．3材料和仪器心脑浸液干粉(青岛高科园海博生物技术有限公司，批号20070621)布氏肉汤干粉(青岛高科园海博生物技术有限公司，批号20070228)无菌脱纤维羊血(湘临检验中心，批号001516)胎牛血清(北京鼎国生物试剂有限公司，批号20070930)蛋白胨(北京奥博星生物技术责任有限公司，批号20070130)酵母浸粉(北京奥博星生物技术责任有限公司，批号20070202)牛肉粉(北京奥博星生物技术责任有限公司，批号20070321)葡萄糖(湖南师大化学试剂厂，批号20061230)琼脂粉(

3、北京奥博星生物责任有限公司，批号20070404)硫酸镁(河南省焦作市化工三厂，批号20061010)硫酸锰(河南焦作市化工厂，批号20061010)磷酸氢二钾(河南省焦作市化工三厂，批号20061010)柠檬酸二铵(湖南湘中精细化学品厂，批号20090510)乙酸钠(广东省台山市化工厂，批号20060304)吐温．80(西安富力化学厂，批号20061012)氯化钠(广东省台山市化工厂，批号20060304)磷酸氢二钠(河南省焦作市化工三厂，批号20061010)多聚甲醛液(上海凌峰化学试剂有限公司，

4、批号20070203)高盐甘露醇培养基(湖南省益阳生化试剂厂，批号20070412)伊红一美蓝培养基(北京奥博星生物技术责任有限公司，批号20070130)七年制硕士论文第一章材料与方法快速尿素酶试剂盒(福建三强生物化工有限公司，批号20070801)髓过氧化物酶(MPO)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号20070506)质子泵抑制剂：泮立苏针剂(40mg／支)(杭州中美华东制药有限公司，批号040805)抗生素：克拉霉素注射剂(40mg／2m1)(江西汇仁药业有限公司，批号0710019)氨苄青

5、霉素针剂(O．59／支)(华北制药股份有限公司，批号0704307)超净工作台(型号SWCJ．IF)厌氧培养箱(型号BAC．HI．m)厌氧盒(英国)。1．2实验方法1．2．1Hp培养和益生菌菌液制备1．2．1．1Hp培养增菌Up复苏后取长势良好者密集划线接种子心脑浸液血平板，置于厌养箱中微需氧环境(5％02，85％N2，lO％C02)培养3"--5天。1．2．1．2制备菌悬液无菌接种环从心脑浸液血平板上收集Hp菌落于无菌生理盐水成混悬液，比浊法调整菌悬液终浓度为l×109CFU／ml。1．2．1．3．

6、益生菌悬液、药液的配制：将近期已记数CMS—H001菌粉，用无菌生理盐水配成悬液，混匀，调整菌悬液终浓度为1×109CFU／m1及4×109CFU／ml两种。蒙古沙鼠的药物剂量按人与各种动物之间的用药剂量换算：已知A种动物每kg体重用药量，欲计算B种动物每kg体重用药剂量时，可查表，找出折算系数(w)再按下式计算：B种动物的剂量(mg／kg)=WXA种动物的剂量(mg／kg)。由上述公式计算出各种药物的剂量如下：泮立苏针剂(40mg)用6．6ml无菌生理盐水稀释成浓度为6mg／ml的溶液氨苄青霉素(0

7、．59)用0．416ml无菌生理盐水稀释成浓度为120mg／ml的溶液克拉霉素(O．259)用7．14ml无菌生理盐水稀释成浓度为35mg／ml的溶液。1．2．2实验动物分组及治疗方法’1．2．2．1动物模型的建立：56只清洁级蒙古沙鼠随机分成7组，每组8只，第5组预防处理组在接种HP前一周每天禁饮8h，让其自由饮用CL22新鲜菌悬液1×109CFU／ml，连续7天。除正常组外均接种ATCC43504Hp菌液，0．6ml／只(约含七年制硕士论文第一章材料与方法ATCC43504Hp为109CFU／m1

8、)，所有动物灌胃前禁食12h，连续3次，1周完成。接种后第5周随机各处死6只沙鼠，取胃黏膜评估其Hp感染及炎症情况。1．2．2．2实验动物分组：将造模成功的6组蒙古沙鼠，每组8只。第1组为PPI三联干预治疗组(三联疗法组)第2组为粪肠球菌CMS—H001处理组(CMS—H001组)第3组为粪肠球菌CMS—H001和三联疗法联合处理组(三联合并CMS—H001组)第4组为三联疗法处理后粪肠球菌CMS-H001接种一周(三联一cMS—H001组)第5组为预防