cyp1a1基因多态性与食管癌遗传易感性的-研究

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1、山西I科大掌硕士掌位论文依据CYPIAl3’端非编码区是否有MSPl酶切位点【4】，人群呈现A、B、C三种基因型。没有MSPl酶切割位点的等位基因m，的纯合子(ml／m1)为A基因型；有MSPl酶切割位点的等位基因的纯合子(m加：)为C基因型；以及由m，和m2形成的杂合子(m，／m2)的B基因型。三种基因型在不同人群中的分布表现出较大的差异，研究表明，C基因型是易感基因型【5】。在CYPIAl第7外显子heme-bmding区域发生A—G转换时，人群中也呈现三种不同基因型：A型(1l朝le)、B型(Uemm)、C型(VaVV甜)[6J，其中C型活化多环芳烃(PA

2、n)能力最强，B型次之，A型最弱。动物实验表明，细胞色素P4501A1可在鼠食管癌表达。长治地处太行山区，食管癌死亡率高达80～／10万，因此对该地区人群进行Exon7、MSPl基因的分子流行病学研究，并结合环境因素进行分析，将有利于揭示食管癌发生的病因，提示对肿瘤易感者预测的水平。材料与方法l、研究对象：73例食管癌病例来自长治和平医院和和济医院。病例由组织病理学、内窥镜检查确诊的2001年8月--2001年12月病人组成，并且要求无任何其它部位肿瘤，未经放疗和化疗。75例对照来自同期同医院的非肿瘤患者，如心血管疾病、外伤、支气管炎患者等，两组均为在长治地区生

3、活15年以上的常住居民，年龄、性别等分布均衡。竺!苎兰查竺一————J竺掣兰兰鲁2、调查内容：包括一般人口学特征及环境因素(吸烟、饮酒、饮食习惯等)。3、标本收集及DNA提取：取病例和对照外周静脉血5ml(用ACD抗凝)，用白细胞DNA快速提取法【刀提取白细胞的DNA。加NP40破坏核膜，用酚，氯仿抽提数次，乙醇沉淀，加消毒水溶解DNA于一20"C保存。4、试剂与材料所用试剂均由上海生物工程公司提供，Biofugel5R低温离心机由德国Hemeus公司生产，PTC-100PCR仪由日本MJResearch公司生产，TH-II型PCR仪由华美生物工程公司生产，YJ

4、875医用净化工作台由苏州净化设备厂，微波炉由美的公司生产，DY-W1型电泳仪由北京试验设备厂生产，WD．9403E型紫外分析仪由北京六一仪器厂。5、基因分型(1)MsPl基因分型：引物：Pl：5’一CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT-3’P2：5’-TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT-37PCR扩增：反应体系为25ul，其中200pmol／l心ⅡPs、10×Buffer缓冲液2．5ul、1．5mmol／1MgCl2，基因组DNAl0---100ng、引物P1、P2各O．5l,tmol／1、酶1．5u、97℃预变性7rain、95℃50s、60℃

5、50s、72℃60s、30个循环、终延伸72℃10rain。酶切：取20

6、IlPCR反应产物加入10×buffer酶切缓冲液3ul，MSPI内切酶2lll，在37℃消化3小时。山百医科六攀硬士学位论文电泳：酶切产物在1．8％琼脂糖凝胶电泳检测。(2)Exon7基因分型：引物：P1：5’-丸蛔ACC．I℃CCJ蜒℃咖丸虹_37P!：57-GAACTGCCACTTCAGCTGTCT-3’P1’：57-AAGACC．I℃CCAGCGGGCAAC-3’PCR扩增：Pl与P：，P】7与P2分别组成一对引物，分别编为a管和b管，进行PCR扩增，产物为183bp片段。反应体系

7、混合物各组分浓度同前，PCR循环条件除复性为66℃50s外，其余同前。电泳：PCR扩增产物在1．8％琼脂糖凝胶电泳检测。6、统计分析在SPSSl0．0统计软件下，对病例组和对照组年龄、性别进行均衡性检验，应用logistic回归对可疑危险因素进行单因素、多因素和联合作用分析。在联合作用分析中联合作用指数S=(RR++--D／(RR．一一1)+O汛一+一1)，联合作用净增部分用病因分数EF表示=呲一RtL一一RR一++1)／础艮．[sl。结果1、MSPl的电泳结果：模本显示一条340bp条带为A型；显示两条分别200、140bp条带为C型；显示三条分别为340、2

8、00、140bp条带为B型。(图1)坐!苎兰查竺————!!三苎!竺!竺2、Exon7的电泳结果：模本只在a泳道显示183bp条带为A望e[(1le／1le纯合体)；只在b泳道显示183bp条带为C型(vavvm纯合体)；在a、b泳道均显示183bp条带为B型(1le／Val杂合体)。(图2、3、MSPl三种基因型在食管癌病例和对照中的分布情况表1MSPl三种基因型在食管癌病例和对照中的分布情况Xz=-8．277P=O．016OR=2．53OR95％CI为(1．27—5．02)由表1可知食管癌MSPlA、B、C三种基因型频率分别为27．40％、41．10％、31

9、．50％，与对照组(49