sm22α抑制球囊损伤诱导新生内膜的形成

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1、中文摘要SM22Q抑制球囊损伤诱导的新生内膜形成摘要目的：经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty,PTCA)是目前治疗冠心病的安全、有效方法之一，但其远期效果受到局部血管再狭窄(restenosis，RS)的影响。平滑肌22alpha(smoothmuscle22alpha，SM22a)是血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMC)的一种分化标志物，其表达具有平滑肌组织特异性和细胞表型特异性。为了探讨SM220t与血管内膜增生的关系，本实验利用本室构建的SM

2、22a腺病毒载体表达系统，将其导入内膜剥脱的颈总动脉壁，观察其在血管壁中的表达，以及对球囊损伤诱导的血管内膜增生的影响，揭示SM22a抑制内膜增生的分子机制。方法：1颈总动脉球囊损伤动物模型的复制及分组将SD大鼠(250～300g)常规麻醉消毒，沿颈部正中线切口，分离暴露左侧颈总动脉与颈外动脉，在颈外动脉远心端剪一楔形切口，球囊导管自切口插入至主动脉分支处，充盈球囊后将其拖回至颈外动脉切口处，如此反复三次，球囊减压后退出。夹闭颈总动脉近心端，由切口处注入20肛lpAd．SM220t溶液，结扎颈外动脉，关闭切121。20min后打开近心端血管夹，恢复血流。实验动物

3、分为三组，uninfected组、pAd组和pAd．SM220t中文摘要组。2标本的处理术后从股动脉放血处死大鼠。取大鼠颈总动脉并将血管分为两部分，一部分匀浆，提取组织蛋白，用Westernblot方法检测血管壁中SM22cr、p-Raf-1、P．MEKl／2和p-ERKl／2的表达变化。另一部分做病理切片，HE染色观察血管内膜增生情况并进行形态测量学分析，其余切片行免疫组织化学染色，观察SM22a、PCNA和p27在血管壁中的表达情况。结果：1外源性SM22a在血管壁中的表达Westernblot结果显示，pAd．SM22a组中SM22a的表达水平明显高于un

4、infected组和pAd组。同时，免疫组织化学染色亦显示，在pAd．SM22a转染组血管壁中，SM22a的表达量明显增加，阳性染色细胞数量及着色强度较其余两组明显增强，与Westernblot结果一致。2过表达SM220t抑制球囊损伤诱导的血管内膜增生形态学分析显示，球囊损伤14天后，uninfected组与pAd组中膜内的VSMC排列紊乱，内膜呈弥散性增厚，管腔缩小，内膜／中膜(intima／media，I／M)比值分别为2．43i-0．21和2．19+0．19，两组之间无明显差异。而pAd．SM220t组血管内膜的增生程度和I／M比值(o．68+0．12)

5、明显小于uninfected组和pAd组(尸

6、M22a过表达抑制球囊损伤后血管壁中PCNA的表达，促进p27的表达。4SM22a过表达可抑制球囊损伤诱导的Raf-1、MEKl／2和EIⅨl／2的磷酸化活化Westernblot结果显示，与uninfected组和pAd组相比较，pAd．SM22ct组中Raf-1、MEKl／2和ERKl／2的磷酸化水平显著下降，SM22a对ERK／MAPK途径具有较强的抑制作用，而uninfected组与pAd组相比，上述三种蛋白磷酸化水平无显著差异。结果提示，SM22a过表达抑制Raf-1、MEKl／2和ERKI／2的磷酸化活化。结论：1成功建立颈总动脉腔内感染pAd．SM

7、22ct腺病毒载体的模型。2SM22a过表达显著抑制内皮剥脱诱导的血管内膜增生。3外源性SM22a可下调增殖相关基因PCNA表达和上调细胞周期抑制因子p27表达。4SM22tx过表达可抑制球囊损伤诱导的Raf-1、MEKl／2和ERKl／2的磷酸化活化，通过阻断Raf-1．MEKl／2．ERKl／2通路级联活化而抑制新生内膜形成。关键词：SM22a；在体感染；球囊损伤；新生内膜。英文摘要SM22aInhibitsNeointimalHyperplasiaafterBalloonInjury。RatInv-ABSTRACTObjective：Percutaneou

8、stranslumina