tim3tim3l通路在天然调节性t细胞和诱导调节性t细胞免疫抑制效应中的研究

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1、华中科技大学博士学位论文摘要第一部分TGF-β1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达的影响[目的]研究TGF-β1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达水平的影响。d[方法]以丝裂霉素处理的Balb/C(H-2)裸鼠脾细胞为刺激细胞，CFDA-SE标记的bC57BL/6(H-2)小鼠的T细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞培养（mixedlymphocytesculture,MLC）。分别设立对照组（TGF-β10ng/ml）、低浓度组（TGF-β11.0ng/ml）、中等浓度组（TGF-β15.0ng/ml）和高浓度组（TGF-β110.0ng/ml）。MLC结束后利用Ala

2、marBlue法检测T细胞增殖活性，流式细胞仪（FACS）检测CD3、CD25表达水平。同时设立IL-2组(TGF-β15.0ng/ml+外源性IL-2100u/ml)，以观测其对TGF-β1生物学效应的影响。[结果]TGF-β1可明显降低同种抗原活化T细胞的增殖反应强度（对照组vs低浓度组，p<0.05），而且随着TGF-β1剂量加大，免疫抑制能力增强（低浓度组vs中浓度组，+p<0.05）。TGF-β1在抑制T细胞增殖的同时，也使得CD25T细胞比例上调(对照组vs低浓度组，p<0.05)，但并无明显的剂量依耐性。加入外源性IL-2后，T细胞增殖活性增+强(IL-2组vs中

3、浓度组，p<0.05)，同时CD25T细胞比例降低（IL-2组vs中浓度组，p<0.05）。+[结论]TGF-β1可明显抑制同种抗原活化T细胞的增殖，并使CD25T细胞表达增加，+而外源性IL-2则可逆转TGF-β1的免疫抑制功能，下调CD25T细胞比例，说明TGF-β1的生物学效应要受到外源性IL-2的影响。[关键词]TGF-β1;IL-2;CD254华中科技大学博士学位论文+-第二部分TGF-β1诱导CD4CD25T细胞分化为++CD4CD25调节性T细胞++[目的]研究TGF-β1诱导CD4CD25调节性T细胞分化的能力及其相关机理。[方法]1、利用丝裂霉素处理的Balb

4、/C裸鼠脾细胞刺激C57BL/6小鼠T细胞，同时给予TGF-β1予以干预（按TGF-β1剂量不同设立4组：对照组，低浓度组，中浓度组和高浓++度组），共同培养5天后，用流式细胞仪检测CD4CD25T细胞比例；同时用RT-PCR检测培养细胞中Foxp3的表达水平。2、在第一部分实验基础上，通过MACS分离获取+-C57BL/6小鼠CD4CD25T细胞，用同种抗原刺激后，给予TGF-β1干预，培养5天后分++离CD4CD25T细胞，利用混合淋巴细胞培养系统检测其抑制淋巴细胞增殖的能力。++[结果]T细胞经同种抗原刺激后，在中、高浓度TGF-β1诱导下CD4CD25T细胞比例均明显升

5、高，Foxp3的表达水平也相应增加，与对照组相比有显著性差异（p<0.05）。+-++++TGF-β1可直接诱导CD4CD25T细胞转化为CD4CD25T细胞，转化后的CD4CD25T细胞能有效抑制淋巴细胞增殖。+-++[结论]TGF-β1可诱导CD4CD25T细胞转化为CD4CD25Treg，促进其表达Foxp3，并能抑制淋巴细胞增殖。[关键词]TGF-β1;Foxp3;调节性T细胞第三部分TGF-β1诱导的调节性T细胞体内输注延长小鼠皮肤移植物存活[目的]利用TGF-β1体外诱导naïveT细胞分化为调节性T细胞，通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间，并研究其相关机理。[

6、方法]根据诱导条件不同分为三组：对照组（加入IL-2培养的C57BL/6小鼠T细胞）、MLR组（经同种抗原刺激活化的C57BL/6小鼠T细胞）和TGF-β组（经同种抗原刺激活++化的C57BL/6小鼠T细胞，同时加入5.0ng/mlTGF-β1诱导）。利用FACS检测CD4CD25T细胞比例，并用RT-PCR检测Foxp3的表达水平。建立小鼠皮肤移植模型，并于0、1、5华中科技大学博士学位论文2和3d输注上述细胞，观察皮肤移植物存活时间。术后第9天，取部分受鼠行移植物病++理检测，用FACS检测脾脏中Th1、Th2和CD4CD25Treg比例，并用AlamarBlue法检测淋巴

7、细胞增殖能力。++[结果]TGF-β组中CD4CD25T细胞比例高于对照组和MLR组（p<0.05），且其高表达Foxp3。将培养的细胞输注给受鼠后发现，输注MLR组细胞的受鼠其移植物平均存活时间（meansurvivaltime,MST）为（9.4±1.3）d，低于对照组（p<0.05）；而输注TGF-β组细胞小鼠MST为（22.8±1.9）d，较对照组和MLR组明显延长（p<0.05）。病理检测亦显示TGF-β组受鼠移植物结构完整，无明显淋巴细胞浸润。FACS结果显示TGF-β组++小鼠