美洲商陆抗真菌蛋白（paafp）基因在烟草及玉米中的遗传转化

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1、第一篇美洲商陆抗真菌蛋白(P础钮P)基因在烟草中的遗传转化摘要P幽。FP僻口merfcⅡn口AntifungalProtein)是从美洲商陆㈣y幻肠c∞nmerf翻ML．)的种子中分离出的一种抗真菌蛋白。P诅FP从萌发的种子中释放出来，形成抵抗病原菌的抑制区域，以抵挡微生物的危害。PaAFP具有强碱性，极强的热稳定性，富含6个半胱氨酸。该蛋白具有lmottiⅡs折叠结构，即一个小型3股反向平行B一折叠片，半胱氨酸序列结构(C⋯C⋯CC⋯C⋯C)组成二硫键框架和其采用的配对形式(1—4，扣-5，3

2、—6)。它对包括立枯丝核菌(砌咖c^伽缸sD缸托f)在内的多种丝状真菌和革兰氏阳性菌生长有很强的抑制作用。目前还没有将PaAFP蛋白转化植物的报道。烟草是生物学研究中的模式植物。具有生长周期短，易培养等多种优势。本实验以美洲商陆的叶片为材料提取基因组DNA，利用PcR技术扩增Pa觚甲基因，切除内含子，连接第一外显子和第二外显子，得到PaA即基因cDNA片段。将P拟心P前体蛋白基因与ubi启动子、Nos终止子同时克隆于质粒pCAMBIAl300中，构建成为植物表达载体pC』Ⅶm认1300_PaAF

3、P。将重组质粒转入农杆菌LBA4J404中，通过叶盘法侵染烟草，通过组培，得到转基因植株。提取转基因烟草总DNA，经PCR，PCR—S0uthemblottillg证实，PaAFP基因已整合到烟革基因组中。RT-PCR检测证明，PaAFP基因已在转基因烟草中转录成mmqA，sDs．PAGE电泳中出现了与目的蛋白相应分子量的蛋白条带。转基因植株苗期抗立枯病试验表明，转基因烟草植株对立枯丝核菌表现出了抗性。关键词：PaA即基因，烟草，根癌农杆菌，抗真菌，立枯丝核菌，白斑3The1hnsformati

4、OnandExpressiOnofPaAFPGenein7I’0baccoAbstractP“蛀平isanan廿fLmgalpmteinis01ated右romt11eseedofA蜘kcc口口me一∞n口L．Thepmteinisseed—specific锄dreleasedfI_0mtllegemill撕ngseedtothesoiltoformapmtectionzoneagainstpathogens．smallcysteine省cbpmteinishi911lybasicandt11e

5、硼ostable，whichconsistsof38afIlin0acidresidueswithsixcySfeiⅡe．ItsfraIneworkcon住jnsasmall仃iple·sIralldeda11tiparallelB·s11eetanddisulphidebond劬mework埘tlla咖跎nsus∞q岫nce(C⋯C⋯CC⋯C⋯C)andtll8pa湎ngpa仕em(1—4，2__5，3__6)showsaho仕in_typestrllcttlralmot正PaAFPobvio

6、uslyinhibnsthe蓼owth0f鼢切c幻n缸5D肠以f瞄ihⅡmv加口．Inadd“ion，iti11hib池the粤owIhofother∞i1_bomep岫ogenicfIlngiandScVefal乒am—pOsitivebacceria．Thepmteiniss”t置1eSized鹊apr。cursor姐dpmcesscdintoitsmamrefoⅡniⅡtheproce船ofsecrction．Sofarthere’sbeennot柚yresearchon缸彻sfo皿】in

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