商陆根中抗真菌蛋白的分离和特性研究

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1、云南檀物研究1991；13(4)；417—424AetaBotanleaYmmanica商陆根中抗真菌蛋白的分离和特性研究陶应双胡忠(中国科学院昆明植物研究所，昆明65020,1摘要从美洲商陆(PhytolaccaamericanaL．)夏天采集的2—4年生宿根中分离了二种抗真菌蛋白，称为PAFP—R，和PAFP-R，．分离程序包括用盐溶液提取，经CM—Sephadex离子交换层析、凝胶过滤层析和羟基磷灰石柱层析纯化。在PGA培养基上，O．1mg／ml蛋白明显抑制术霉菌丝的生长；但对细菌的增殖，即使1mg／ml也无抑制作用．用SDS—PAGE

2、测得二者的相对分子量各为13kD和15kD，单多肽链，等电点约为5．8。用酚—硫酸法未测出含糖．二种蛋白均高含半胱氨酸(19mol／mo1)。用Ednlan降解法测得二者的N末端均为Ah。秋天采集的根中，这二种蛋白含量均很低，但富含由二条PAFP—R肽链以双硫键联结的二聚体，它无抗真菌活性，冬天宿根中抗真菌蛋白主要成分是Mr为I7kD的单肽链蛋白。上述蛋白对于人红血球均无凝集活性，因此不是PWM的成分。以上结果说明，商陆根中有多种具抗真菌活性的蛋白，成分随季节发生变化，它们都是不含糖，高含半胱氨酸，分子量小于20kD的单肽链蛋白。关键词美洲商

3、陆，抗真菌蛋白IS0LAT10NANDCHARACTERlZATloN0FANTIFUNGALPR0TEINSFR0MTHER00TS0FPHYT0LACCAAMERICANA(POKEWEED)TAOYing—Shuang，HUZhong(KunmingInstituteofBotany．AcademiaSinica．Kunming650204Al~tractFromsu]~fflerharvestedroots0f2_—4yearsoldplantsofPokeweed，twoantifungalproteinsnamedPAFP—R1a

4、ndPAFP—R2wereisolatedbyusingaprocedureincludingextrac-*．ionwithsalinesolution，purificationwithionexchangechromatography0nCM-sephadex，gelfiltrationonsephadexG5oandchromatographyOilhydroxyapatiteBothproteinsat01mg／mlinhibitedobviouslythegrowthofTrichodermaviridemyceliaonaPGAm

5、ediumplates，butevenat1mg／mldidnotinhibitthemultipJicafionofbacteriaEcolaandBsubt~．Theyaleb0thasingtepolypeptldewithMrof13kDandl5kDrespectively，withapIofabout5．8andwithAlaastheN-terminusBothproteinsalerichinCys，i．e，19mol／real，1990年10月收稿，1991年1月定稿+国家863计划资助项目．418云南植物研究13卷andi

6、nthemnocarbohydratewasdetectedbyphenol—sulfatereactionDiferingfromsUmmerharvestedroots，lateautumnharvestedrootscontainedmuchlessPAFp—RIandR2，butmoredimerofPAFpR-linkedbydisulfidebondswhichisofnoantifungalactivityInwinterhat-vestedroots，themainantifungalcomponentwasfoundt0be

7、aprotdnof17kDThesepro-reinsareallofnohemagglutinationacfivRytOhumanerythrocytesevenat2nag／m1．theyare晤notthecomponenofpoke,~eednaitogen(PwM)KeywordsPh，totaccaamericana啦okeweed；Pokeberry)~Antifungalproteins文献中已报告从植物分离出多种蛋白，它们在体外试验显示有抗真菌活性。广为研究的是几丁质酶和一1，3～葡聚糖酶，认为它们在作物对真菌病的抗性中起

8、重要作用’。核糖体失活蛋白(RIP)和一类富含半胱氨酸的碱性多肽Thionins也显示有非专一的抗真菌活性”。最近，胡忠等人从天麻(Gastrodiadata)球茎