间尼索地平的质量控制和体内外代谢的研究

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2、研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含

3、其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名擐莠嘲导师签名。2黝2尸中文摘要问尼索地平的质量控制和体内外代谢研究摘要间尼索地平(m．nisoldipine)[化学名称：l，4．二氢．2，6．二甲基．4．(3．硝基苯基)一3，5．吡啶二羧酸甲酯异丁酯】是河北医科大学药学院首次合成的一种新的二氢吡啶类钙拮抗剂。间尼索地平与尼索地平(nisoldipine)为同分异构体，尼索地平用于防治冠心病、高血压和慢性充血性心衰及心源性休克，疗效显著，但是对光不稳定，通过结构改造，间尼索地平不仅

4、保留了尼索地平的药理作用，而且光稳定性也明显增。目前，间尼索地平的含量测定方法主要有铈量法，紫外分光光度法以及高效液相色谱法等。本研究首次采用气相色谱法(GC)，气相色谱．质谱联用(GC．MS)法，以尼莫地平(nimodipine)为内标，测定了间尼索地平原料药的含量。药物代谢研究在新药研发中占有很重要的地位，它可以使我们预知候选的新药化合物在体内可能的代谢物及其潜在的毒性，另一方面可以使我们预知在体外有效的药物是否在体内同样有效，因为许多在体外有效的药物在体内疗效很差或无效，这主要是由于这些化合物在体内的吸收和代谢转运等方面的原

5、因所造成的。因此，这一工作可为新药在体内的代谢过程和毒性评价提供重要的依据，同时根据其代谢物的生物活性和毒性，可以合成更为安全有效的候选化合物。本文从体外到体内两个方向对间尼索地平的代谢进行了初步的研究，发现了多个代谢物。通过微生物转化方法得到一转化产物的纯品，并进行了结构确认。对间尼索地平在中文摘要大鼠体内的代谢途径有了一定的推断。第一部分GC与GC．MS法测定间尼索地平含量目的：建立GC和GC-MS法测定间尼索地平原料药含量的方法，为其质量控制提供依据。方法：1．GC法：(1)确定色谱条件：选择毛细管色谱柱，优化仪器参数，如进

6、样口温度、柱温、检测器温度等，调整流动相流速，确定分析条件。(2)进行方法学考察，测定样品。2．GC．MS法：(1)确定色谱条件，如：色谱柱的型号、进样口温度、柱温、载气流速、进样模式等。(2)确定质谱条件，如气质接口温度、离子源温度、四级杆温度、EI电离能量、检测模式等。(3)进行方法学考察，测定样品含量。结果：1．GC法：(1)色谱条件如下：固定相为100％二甲基硅氧烷的HP．1毛细管柱(50mx320}tm×0．521xm)，柱温：265℃；进样口温度：295℃；ECD检测器，检测器温度：300。C；载气为高纯氮气，流速：4

7、．0mL·minl；进样量1此，分流进样，分流比20：1。(2)该法重复性良好，RSD为O．1％，平均回收率为99．5％，RSD为0．4％("=9)。3批样品的含量均大于97％。2．GC．MS法：(1)色谱条件：色谱柱DB—lms毛细管柱(30mx250Ⅲ'nx0．25pm)；载气为高纯氦气，流速0．8mL·min～；升温程序：在200℃的基础上20℃·mino升温至260℃，恒温5min，然后lO℃·mind升至300℃，恒温3min结束，运行时间15min；进样口温度250℃；不分流进样。(2)质谱条件：气质接口温度250℃；

8、离子源温度230。C；四级杆温度150℃；E1电离方式，电子能量70ev；检测模式为SIM模式；用于定量的特征质谱峰为m／z266．0，中文摘要210．0(问尼索地平)和m／z296．0，254．0(内标尼莫地平)，溶剂延迟4rain。(3)该法重复性的RSD为O．4％，平均回收率为98．9％，RSD为0．3％(终=9)。结论：本文建立了GC和GC—MS法测定间尼索地平原料药含量的方法，该法准确、灵敏、快速，可用于间尼索地平的含量测定。第二部分间尼索地平体外代谢研究目的：研究间尼索地平在大鼠肝微粒体内的酶促反应动力学；通过肝微粒体

9、温孵、微生物转化、肠道菌厌氧培养等多种方法寻找代谢物，并尽可能的制备转化产物单体。方法：1．酶促反应动力学研究：(1)确定色谱条件及样品处理方法。(2)进行方法学验证。(3)考察时间、蛋白浓度、底物浓度等因素对问尼索地平在大鼠肝微粒体中代谢消除速率