fcγrⅲa的基因多态性、血清中抗体及补体对利妥昔单抗介导的nk细胞对raji细胞杀伤作用的影响

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1、中山大学FcyRIIla的基因多态性、血清中抗体及补体对利妥昔单抗介导的NK细胞对R面细胞杀伤作用的影响FcYRIIIa的基因多态性、血清中抗体及补体对利妥昔单抗介导的NK细胞对Raji细胞杀伤作用的影响专业：儿科学。硕士研究生：屈钰华导师：黎阳副教授中文摘要肿瘤是临床常见的疾病，采用常规化疗常难以治愈，而增加化疗强度虽能缩小肿块，提高缓解率，却无益于延长患者生存期。对大部分肿瘤来说，即使高剂量化疗配合手术或造血干细胞移植，也很难进一步提高其疗效。要扭转这种局面需寻找一种高效、低毒的新型抗肿瘤制剂。肿瘤特异性单克隆抗体(monoclonalantibody，

2、MAb，简称单抗)是应用杂交瘤技术针对肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原或特定的受体而制备出的MAb，可特异性识别肿瘤细胞抗原，选择性地摧毁肿瘤细胞而健康细胞基本不受影响，为肿瘤患者的靶向免疫治疗带来了希望。针对特定肿瘤抗原的MAb杀伤肿瘤靶细胞的机理主要有三个方面：①抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC)溶解靶细胞；0通过补体依赖的细胞毒性(complementdependentcellcytotoxicity,CDC)；0直接和靶细胞结合促进肿瘤细胞凋亡。ADCC被证明是MA

3、b临床治疗肿瘤的重要机制和手段。MAb首先通过抗原结合部位与靶细胞(肿瘤细胞)结合，再由效应细胞上的FcyRIIIa识别其Fc段，介导ADCC作用。FcTRIIla是唯一表达于NK细胞上可与kG结合介导ADCC作用的Fc受体。FcTRIIIa有三种基因型：Fc丫RIIIIa．158F／F，Fe),RIIIa-158VⅣ及中山大学RYR皿h的基因多态性、血清中抗体及补体对利妥昔单抗介导的№细胞对R李细胞杀伤作用的影响Fc丫RIIIa-158V／F。Fc丫RIIIa的多态性可影响NK细胞及单核细胞的ADCC效能。有研究认为Fq,RIIIa-158V较Fe't'R

4、I／／a-158F与人埝G结合具有更高的亲和力，可更有效介导ADCC作用，而具有更好的治疗效果。有研究报道Fq,RRIa-158V／V基因型病人，通过MAb治疗的疗效较FcTRIIIa-158V／F及Fcq,RIIIa-158F／F基因型病人好。正常生理情况下血清中抗体水平由于可竞争性与杀伤效应细胞上的FeyR结合而降低MAb介导的ADCC抗肿瘤疗效；有研究表明血清中的kG可竞争性抑制曲妥珠单抗的ADCC效应，该抑制作用可通过增加曲妥珠单抗的剂量而逆转；这种竞争抑制作用可能是临床上通过ADCC机制治疗肿瘤需大量的MAb的重要原因。对于有补体缺陷的难治性慢性淋

5、巴细胞性白血病的病人，有临床实验证明，在于利妥昔单抗治疗时，通过同步输新鲜冰冻血浆的方式来增强的补体作用，可达到更好的治疗效果。这可能与增加补体的CDC作用有关，通过血浆补体增加肿瘤特异性MAb的CDC效应，从而达到更好的对肿瘤细胞杀伤作用。由于临床使用的肿瘤特异性MAbtIE常昂贵，其介导的ADCC抗肿瘤治疗的病人在治疗期间由于化疗所致的骨髓抑制、合并感染等原因，往往需静脉注射免疫球蛋白(ⅣIG)及血浆，上述治疗所提供的血清抗体和补体对ADCC抗肿瘤效应的影响尚不十分清楚，深入研究在肿瘤特异性MAb治疗应用过程中WIG和血浆的配合应用十分重要。本试验中尝试

6、使用nest-PCR的方法检测出健康儿童及血液肿瘤患)LqaFe7RIIIa的基因多态性的分布，了解血液肿瘤患儿对MAb可能的疗效反应；通过体外实验用利妥昔单抗介导不同FcFRm堪因型的NK细胞对高表达CD20的B细胞淋巴瘤细胞株(Raji细胞株)杀伤，确定不[-n-JFq,RIIIa基因型的NK细胞所介导ADCC效应的差异；并通过增加补体及血清抗体的方式体外检测它们对利妥昔单抗介导ADCC抗肿瘤作用影响。通过本研究我们希望对使用抗肿瘤特异性MAb的患者合理有效的应用WIG和血浆提供指导意见及实验依据；这对提高肿瘤特异性MAb的临床疗效和改善肿瘤患者的生存率

7、具重大意义。II中山大学№yR皿b的基因多态性、血清中抗体及补体对署q妥昔单抗介导的NK细胞对R面细胞杀伤作用的影响第一部分正常儿童及血液肿瘤患)L中VcTRIIIa基因多态性分布目的：检测健康儿童及血液肿瘤患)LqbFeyRIIIa的基因多态性的分布，了解血液肿瘤患儿对MAb可能的疗效反应。方法：1．按照DNA{是取试剂盒从收集的外周血标本中提取基因组DNA。2．巢式PCR(ncst-PCR)扩增FcTRIIIa基因：(1)外侧PCR：外侧正义引物A为5’TGGCAAAGGCAGGAAGTATT3’，外侧反义引物B为5’GCGTGTAAGAATCAGGAA

8、TCTC3’，25此反应体系包括Ⅸ妊模板3pL，正反