臭氧对兔膝关节骨性关节炎作用的实验的研究

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1、只兔随机分为2组，分别为治疗组16只，模型组16只，采用Hulth模型，自手术当日起肌注普鲁卡因青霉素40万u，每日一次，连续3天；治疗组每日向治疗组兔左膝关节腔内注射40rag／L0：一0，混合气体2ml，连续注射7天；对照组每日向对照组兔左膝关节腔内注射40mg／L0：2ml，连续注射7天；连续注射7天后，耳缘静脉注入空气处死实验兔，将实验兔的左膝关节备皮，碘伏消毒，切开左膝关节腔，行大体观察，锐利刀片切取左侧股骨内髁关节软骨修剪成1×1×2mm的小条；3％戊二醛酸固定24小时；O．1M磷酸缓冲液冲洗3次；0．1％四氧化锇固定90min；去离

2、子水冲洗3次；不同浓度丙酮逐级脱水；脱钙液脱钙后以61G环氧树脂浸透、包埋、硬化后修块，半薄切片；定位后切0．05ram超薄切片，电子染色后电镜观察。结果：OA对照组大部分的软骨细胞明显肿胀且形态不规则，细胞周晕消失，粗面内质网明显扩张，微绒毛断裂且变短，粗面内质网网膜溶解断裂，胞浆内可见脂滴存在；细胞核形态不规则，细胞核严重变形、凹陷，出现腔隙陷窝及囊泡形成等改变；0，实验组软骨细胞大部分均正常，细胞为椭圆形或梭形，细胞核完整，可见细胞核内异染质轻度边集，线粒体散在分布于胞浆内，粗面内质网较对照组丰富，表面可见许多微小突起。结论：03试验组的关

3、节软骨细胞退变的程度较oA对照组减轻，软骨缺损也较轻，表明0，能有效延缓关节软骨退变的病理进程。二、03对软骨细胞中IL-1B表达的影响目的：观察O，对Hulth模型OA软骨细胞中IL-1B表达的影响。方法：将36只兔随机分为3组，分别为治疗组16只，模型组16只，正常组4只，采用Hulth模型，自手术当日起肌注普鲁卡因青霉素40万u，每日一次，连续3天；治疗组每日向治疗组兔左膝关节腔内注射40rag／L0：一0，混合气体2ml，连续注射7天；对照组每日向对照组兔左膝关节腔内注射40rag／L0：2ml，连续注射7天；连续注射7天后，耳缘静脉注入

4、空气处死实验兔，将实验兔的左膝关节备皮，碘伏消毒，切开左膝关节腔，耳缘静脉注入空气栓塞处死实验兔，造模的左膝关节备皮，消毒，切开膝关节，刀片切取左侧股骨内髁软骨修剪成1×1×2mm小条，3％戊二醛酸溶液固定24小时；DAB法检测软骨细胞IL一1D；每张切片在软骨破坏的边缘随机选取视野，每个视野计数200个细胞，统计阳性染色细胞的个数，以阳性细胞率作为IL-1D的表达指标。结果：正常组(A组)阳性细胞率为2．815士0．827％，模型组(B组)阳性细胞率为47．159士4．431'／,①，0，治疗组(c组)阳性细胞率为27．771士4．085％②；

5、模型组(B组)与正常对照组(A组)比较，p<0．01；治疗组(C组)与模型组(B组)比较，p<0．05，有统计学意义。结论：实验组软骨细胞中IL-1D含量低于对照组，提示O，能够降低软骨细胞中IL-1p含量，保护关节软骨。三、03对关节液中一氧化氮含量的影响目的：观察03对Hulth模型OA关节液中一氧化氮(nrticioxide，NO)．，，的含量的影响。方法：32只兔随机分为2组，分别为治疗组16只，模型组16只，采用Hulth模型，自手术当日起肌注普鲁卡因青霉素40万U，每日一次，连续3天；治疗组每日向治疗组兔左膝关节腔内注射#0mg7⋯”

6、吨／Lo：一0，混合气体2ml，连续注射7天；对照组每日向对照组兔左膝关节腔内注射40rag／L0：2ml，连续注射7天；连续注射7天后，将实验兔√铀oV以速眠新II号注射液(0．2ml／kg)肌肉内注射麻醉，麻醉效果满意后，将造模的左膝关节备皮，碘伏消毒，膝关节穿刺，刺入关节腔后，用1ml生理盐水冲洗关节腔，反复注入、回抽3次后，抽尽液体，注入试管，-70℃封存备测；硝酸还原酶法测定关节液中NO的含量。结果：对照组No的含量为145．57±12．17，实验组为132．33±11．14，经统计学分析，实验组与对照组比较p<0．05，有统计学意义．

7、结论：实验组关节液中NO含，量低于对照组，提示O，能够降低关节液中NO含量，保护关节软骨。：四、03对软骨细胞iNOS表达的影响目的：观察03对Hulth模型OA软骨细胞中iNOS表达的影响。方法：32只兔随机分为2组，分别为治疗组16只，模型组16只，采用Hulth模型，白手术当日起肌注普鲁卡因青霉素40万U，每El一次，连续3天；治疗组每日向治疗组兔左膝关节腔内注射40mg／L02一03混合气体2ml，连续注射7天；对照组每日向对照组兔左膝关节腔内注射40mg／L022ml，连续注射7天；连续注射7天后，．耳缘静脉注入空气，栓塞处死实验兔，造

8、模的左膝关节备皮，消毒，立即切开左侧膝关节，刀片切取股骨内髁关节软骨修剪成i×1×2mm小条，半定量RT-PCR的方法检测软骨中一氧化氮