颗粒酶b及穿孔素在子痫前期患者外周血及胎盘的表达

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1、中国医科大学硕士学位论文颗粒酶B及穿孔素在子痫前期患者外周血及胎盘的表达姓名：李雪玲申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：魏军20090301·中文论著摘要·颗粒酶B及穿孔素在子痫前期患者外周血及胎盘的表达目的子痫前期(preeclampsia)是妊娠妇女特有的疾病，发病率在我国为9．4％Ill，国外发病率为10％左右眨1。是导致孕产妇和围产儿死亡的主要原因。多年来发病原因不清，目前普遍认为与母胎免疫失衡b1，滋养叶细胞受损，胎盘浅着床H1，导致母体过度的炎症反应‘51及全身血管内皮损伤哳1有关。穿孔素(perforin，PEN)与颗粒酶(granzym，Gz

2、m)主要由成熟的NK(naturalkillercell)和激活的CTL(cytotoxicTlymphocyte)细胞合成，存在于活化的CTL和NK细胞胞浆颗粒中【7’8】．穿孔素是由534个氨基酸残基组成的糖蛋白，有强溶细胞活性，分子量约60KD，蛋白结构和功能与溶细胞性补体蛋白C9相似，人类穿孔素基因定位于染色体10q22。它与颗粒酶、水解性溶酶体酶等共同组成的杀伤颗粒在CTL，NK细胞介导的细胞毒中起作用，是清除病毒感染靶细胞、肿瘤细胞、同种移植细胞的主要途径t910颗粒酶是一组同源性的丝氨酸蛋白酶，包括GzmA，B，K，H等成员，其中GzmB具有天门冬氨

3、酸酶的活性，是主要效应分子，能迅速引起靶DNA断裂t10]。PEN和GzmB存在于活化的CTL和NK细胞胞浆颗粒中，是全身免疫重要的溶细胞效应分子，PEN和GzmB在子痫前期中变化，国外鲜有研究，国内尚未见报导。本研究应用半定量RT-PCR方法及免疫组织化学方法，检测GzmB与PEN在正常孕妇和子痫前期外周血及胎盘中的表达情况，探讨其在子痫前期发病中作用。方法一、研究对象2007年12月．2009年2月在中国医科大学附属盛京医院产科住院分娩的子痫前期患者共30例(包括子痫前期重度患者19例，子痫前期轻度患者11例)，诊断和分类标准参照乐杰主编《妇产科学》(第6版)

4、。选择同期正常妊娠孕产妇30例。各组孕妇均无原发性高血压、糖尿病、肝、肾疾病等，组间年龄、孕周、孕产次无显著性差异，具有可比性。二、标本采集采集各组孕妇空腹肘正中静脉血2ml，置入EDTA抗凝试管中，提取出外周血单个核细胞，．70"C深冻冰箱保存。胎盘娩出后立即在胎盘母体面中央切取胎盘组织约1cm*1cm*1cm，置入4％的多聚甲醛溶液中。三、实验方法(一)用逆转录聚合酶链反应(ImPCR)检测子痫前期患者外周血GzmB与PFN的表达。提取外周血单个核细胞中总RNA，将mRNA逆转录成cDNA后行PCR反应，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，成像，分析，以13-acti

5、n同时扩增作内参照。(二)用免疫组织化学法检测子痫前期疾病患者胎盘组织中GzmB与PFN蛋白的表达。标本固定，脱水，包埋，切片，石蜡切片常规脱蜡，水化，抗原热修复，3％H202溶液室温孵育lOmin，然后按照S．P试剂盒说明书进行实验。四、统计学方法用SPSSl6．0软件进行统计分析，半定量资料比较用卡方检验．定量资料用均数士标准差(X士s)表示，样本均数比较用t检验，P<0．05为有统计学意义。结果一、外周血中GzmB与PFN半定量ImPCR方法检测结果子痫前期患者外周血中GzmB的表达水平明显高于正常对照组，差异显著(P

6、的表达水平高于正常对照组(P0．05)。二、胎盘中GzmB与PFN免疫组织化学染色结果GzmB与PFN的表达主要定位于胎盘蜕膜淋巴细胞及胎盘绒毛合体滋养细胞2胞浆。子痫前期胎盘组织中GzmB蛋白表达明显高于正常对照组，差异显著(P<0．05)，子痫前期胎盘组织中PFN的表达水平明显高于正常对照组(P0．05)。结论1、子痫前期患者外周血单个核细胞中GzmB与PFN水平表达增高，提示子痫前期发病可能与外周

7、血单个核细胞中GzmB与PFN表达增强有关。2、子痫前期患者胎盘组织中GzmB与PFN蛋白表达组较J下常孕妇增强，导致滋养叶细胞受损，胎盘浅着床，胎盘缺血缺氧，从而引发子痫前期的发病。关键词颗粒酶；穿孔素；子痫前期●英文论著摘要TheExpressionoftheGranzymBandperforininPeripheralbloodandplacentasofpreeclampsia0bjectivePreeclampsiaisacharacteristicdiseaseofpregnantwomen．Theincidencerateofthisdiseasei

8、nourc