大鼠骨缺损对脂肪源干细胞bmp信号通路相关分子表达的影响

《大鼠骨缺损对脂肪源干细胞bmp信号通路相关分子表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要细胞等。近期的研究发现，和骨髓干细胞(Bonemarrowstemcell，BMSCs)相比，ADSCs具有取材手术小、可重复进行、酶消化分离程序简单等优点，可以作为新的成体干细胞来源。ADSCs是一种能够自我更新，并且具有多种分化潜能的新型干细胞，可用于急性或慢性组织损伤的修复与再生，诱导后移植到骨缺损部位可修复骨缺损。成骨细胞(Osteoblast．OB)主要由MSCs分化而来，其发育分化过程主要经历四个阶段，即细胞增殖、基质分泌、基质成熟和矿化形成等。该过程受一系列细胞因子、信号分子和周围环境因素等的影响和控制，包括骨形态发生蛋白(bon

2、emorphogeneticprotein,BMP)、转化生长因子2B(transforminggrowthfactor-13，TGF2．13)、钙黏附蛋I兰1(eadherins)等。其中BMP具有非常重要的作用，通过信号转导，具有诱导干细胞成骨的作用。BMP属于转化生长因子．13(TGF．13)超家族的一员，在成骨细胞的发育过程中具有非常重要的作用，能够促进骨的形成。而骨形成的关键在于基质干细胞向成骨细胞分化，BMP在诱导MSCs成骨、修复骨损伤过程中具有非常重要的作用。BMP及其下游的级联蛋白组成的信号转导系统通过影响相关转录因子，如：核心结

3、合因子a(Core．bindingfactoral，Cbfal)，Osterix(osx)，Dlx5／lVlsx2等的表达，或是直接作用于成骨细胞特异性蛋白，如碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)，骨钙素(osteocalcin，OCN)的mRNA，从而促进成骨细胞的分化，刺激骨形成。BMPs信号转导过程是：BMPs首先与II型受体和I型受体结合，I型受体磷酸化Drosophilamothersagainstdecapentaplegicprotein(Smads)，Smads进入核内与转录因子相互作用影响相关蛋白的转录。S

4、mads可分为受体调节Smads(R-SmadS：Smadl、2、3、5、8并139)、共同介导者Smad(Co—Smad：Smad4)和抑制性Smads(I—Smads：Smad6、7)。其中Smadl、Smad5和Smad8，可能还有Smad9涉及BMPs的信号传导。与Smadl和SmM5相关的转录因子有核心结合蛋白Al(corebindingfactorAl，CBFAI)、鸟氨酸脱羧酶拮抗酶(omithinedecarboxylaseantizyme，OAZ)、Smad相互作用蛋白．1(smad—interactingproteinl，SIP

5、l)、蟾蜍腹侧形成同源框蛋白．2(xenopusventralizinghomeoboxprotein一2，Xvent-2)、激活蛋白·1(activatingprotein．1，AP-H硕士学位论文1)、生长抑素(sandostatin,Ski)、抗增殖蛋白(antiproliferativeproteins，Tob)、同源结构域转录因子一8(homeodomain-containingtranscriptionfactor-8，Hoxc-8)等。其中CBFAl与TGF—B和BMP．2信号传导有关，能与Smadl、2、3、5相互作用，在骨形成中起

6、重要作用。目的MSCs的多组织来源性，与筋膜结缔组织支架的全身分布性具有一致性，其横向、纵向分化的生物学特性，与筋膜结缔组织对机体的支持储备作用也是一致的。ADSCs是筋膜中未分化干细胞的一种储备形式。本实验采用大鼠筋膜结缔组织皮下脂肪作为组织来源，分离培养ADSCs，并对其表型鉴定，探讨筋膜结缔组织中对机体产生支持储备作用的细胞学基础；研究ADSCs是否表达与骨损伤修复密切相关的BMP信号通路相关分子；骨损伤后，ADSCs在成骨修复损伤过程中其表面BMP受体和Smads的表达是否增加，BMP信号通路相关分子的表达是否增加。1、通过细胞分离培养判断

7、非特异性筋膜结缔组织中是否存在未分化的间充质干细胞，以及这种干细胞的相关特性；2、通过RT-PCR技术观察ADSCs中BMP信号通路相关分子的表达，以证实ADSCs是否表达BMP信号通路相关分子；3．探索骨损伤后，在修复损伤的过程中自体ADSCs表面BMP受体和Smads的表达变化。方法l、取2月龄Wistar雌性大鼠腹股沟部皮下脂肪组织，采用酶消化法分离、培养脂肪源干细胞。通过细胞形态学、功能学、流式细胞术鉴定非特异性筋膜结缔组织中的脂肪源干细胞细胞是否符合间充质干细胞的特性以及部分表面标志，以验证非特异性筋膜结缔组织中是否含有间充质干细胞。2、

8、将第4代ADSCs经成骨诱导和成脂肪诱导分化培养后，分别进行相应的碱性磷酸酶、茜素红和油红O染色，以鉴定ADSCs的分化潜