中科瑞泰（北京）生物科技有限公司

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1、中科瑞泰（北京）生物科技有限公司Tel:400-699-0631http://www.real-tims.com.cnE-mail:real-times@163.com碱性蛋白非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号:RTD6131）Ver.680564BasicProteinNativePAGEGelPreparationandElectrophoresisKit●产品组成：货号名称规格保存条件AC2913-0130%PAA(29:1)100ml4℃，避光RTD6131-024×碱性蛋白分离胶缓冲液pH4.3100ml4℃RTD6131-034×碱性蛋白浓缩胶缓冲液pH6.830

2、ml4℃AP020PAPS（干粉）0.5gRTTA0761-01TEMED0.5ml4℃，避光PL1105×甲基绿上样缓冲液1ml-20℃TG160P5×碱性蛋白电泳缓冲液（干粉）1LRT●产品简介：本公司提供的试剂盒包含碱性蛋白凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒可用于配制碱性蛋白非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制30-50块常规大小的非变性PAGE胶。各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同，因而有各自的等电点。凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质称为碱性蛋白质，等电点偏碱性，如组蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量较多

3、的蛋白质，等电点就偏酸性。分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。特别说明：由于本系统采用非连续凝胶系统，分离胶pH为4.3，因此要求待分离的蛋白等电点pI＞7.0，这样碱性蛋白在酸性凝胶系统内带正电荷，在凝胶电泳中才能正常向阴极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI＜7.0，请选择非连续Laemmli活性凝胶系统分离（货号：RTD6130）。●使用说明：一配制分离

4、胶（各试剂使用量请参考表二）根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制非变性PAGE的分离胶(即下层胶)。表一不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范围6%50-150kD8%30-90kD10%20-80kD12%12-60kD15%10-40kD注：本制品仅供科研用。请勿用于人体及动物的医疗、临床诊断或作为食品、化妆品、家庭用品的添加剂等用途。1中科瑞泰(北京)生物科技有限公司电话:400-699-0631E-mail:real-times@vip.163.comhttp://www.re

5、al-times.com.cn配制分离胶前，根据以下配方准备10%APS：10%APS配制-5ml：将0.5gAPS干粉溶于5ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10%APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。制备分离胶步骤：1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。2．根据表二，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-g

6、el，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使凝胶表面保持平整。4．静置40-80分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。注：由于分离胶的pH为酸性4.3，凝胶时间较Laemmli系统（pH8.8）要长，可以37℃加速凝胶。凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。配制不同体积的8%分离胶所需各组分的体积(毫升)各组份体积总体积51015203050组份灭菌水2.44.77.19.514.223.74×

7、分离胶缓冲液pH4.31.252.53.7557.512.530％PAA（29:1）1.32.745.3813.310％APS0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0050.010.0150.020.030.05配制不同体积的10%分离胶所需各组分的体积(毫升)各组份体积总体积51015203050组份灭菌水24.16.18.112.220.34×分离胶缓冲液pH4.31.252.53.7557.512.530％PAA（29:1）1.73.356.71