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《四株外生菌根真菌的生物学分类鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、第35卷第9期西南大学学报(自然科学版)2013年9月Vol.35No.9JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition)Sep.2013文章编号:16739868(2013)09013305四株外生菌根真菌的生物学分类鉴定①杨红军1,王洋清2,肖波3,李勇1,黄建国11.西南大学资源环境学院,重庆400715;2.重庆绿色智能技术研究院,重庆401122;3.重庆市药物种植研究所,重庆408435摘要:外生菌根真菌是森林土壤生态系统中的主要类群,它可以和植物根系形成菌根,在建立健康的森林生态系统以及促进林木生长发育、荒山绿化和土壤的
2、生物修复方面具有重要的生态学意义.本文以四株外生菌根真菌为研究材料,用子实体及菌丝形态学鉴定方法与rDNAITS区段序列分析相结合,对菌根真菌进行菌种鉴定.研究结果表明:Bo15,Ld2,Cg04和Pt715分别为Suillusbovinus,Lactariusdeliciosus,Cenococcumgeophilum和Piso-lithustinctorius.关键词:外生菌根真菌;ITS;分类鉴定中图分类号:S718.8文献标志码:A[1]外生菌根真菌是森林土壤生态系统中的主要类群,它可以和植物根系形成菌根,对促进林木生长发育以及荒山绿化、土壤的生物修复有重要意义.外生菌根真菌种类
3、繁多,大约包括49个科,133属,约有5000~6000种,这对外生菌根真菌的认识、研究和实践应用用产生一定的限制,因此开展外生菌根菌种的分类鉴定研究十分重要.目前多采用的是传统方法,依据菌根和菌丝的形态以及子实体特征来[2]进行分类鉴定,这种方法存在诸多不足:在不同的自然条件下,外生菌根真菌的形态特征、生长率和侵染率差异较大,都会导致传统的菌根真菌鉴定方法很难达到准确、简便、快速的目的.随着分子生物学技术的广泛应用,由于基因内转录间隔区ITS(internaltranscribedspacer)序列具有进化速度快,在真[3-5]菌的属间和种间存在巨大的变异等特点被广泛用于种级水平的分类
4、研究中.根据rDNA区段ITS设计引物,进行ITS区段DNA扩增分析,并构建遗传发育图谱的分子鉴定方法,具有操作简便、特异性强和准确性高的优点.[6-8]研究表明,Suillusbovinus,Lactariusdeliciosus,Cenococcumgeophilum和Pisolithustinctorius(Pers.)Coker&Couch在促进森林苗木生长,提高成活率和增强抗逆性等方面有重要作用.本研究采用传统方法和分子生物学技术相结合,对4株外生菌根真菌菌丝体进行分类鉴定,确定了4株外生菌根真菌①收稿日期:20121113基金项目:国家自然科学基金资助项目(41171215)
5、;中央高校基本科研业务费专项资金资助(XDJK2009C121;XDJK2012C035);西南大学博士基金项目(SWU112083).作者简介:杨红军(1978),男,陕西洛南人,博士,主要从事微生物学研究.通信作者:李勇,副教授,Liyongwf@swu.edu.cn.2西南大学学报(自然科学版)http://xbbjb.swu.cn第35卷的分类地位,有利于探索不同外生菌根真菌与不同宿主植物间的共生机理,从而筛选适应不同土壤和环境状况的优良外生菌根菌剂菌种,提高宿主成活率、抗性、生物量等方面发挥更大的作用.1材料与方法1.1供试菌株Pt715,分离自四川西昌桉树林下;Ld2,分离自
6、重庆缙云山马尾松林下;Cg04,分离自内蒙古大青山油松森林,由内蒙古农业大学白淑兰教授捐赠;Bo15,分离自重庆金佛山马尾松森林.1.2主要试剂及引物主要试剂均购自大连宝生物科技有限公司.通用引物ITS1和ITS4,由南京金思特生物技术有限公司合成,引物序列如下:ITS1:5’>TCCGTAGGTGAACCTGCGC<3’ITS4:5’>TCCTCCGCTTATTGATATGC<3’1.3实验方法1.3.1外生菌根真菌子实体及菌丝体的形态学鉴定进行实地调查,采集外生菌根真菌子实体,通过Pachlewsk培养基分离纯化,并对菌丝形态进行显微镜观察,参考相关文献[9-11]对供试菌种进行形态
7、学鉴定.1.3.2外生菌根真菌总DNA的提取将4株外生菌根真菌接种于Pachlewsk培养基,25℃下培养14d后备用.总DNA提取参照有关真菌[12-15]DNA提取方法.1.3.3PCR扩增rDNAITS区段及克隆以提取的外生菌根真菌基因组DNA为模板,ITS1和ITS4为引物扩增rDNAITS区段,PCR反应条件:95℃预变性5min;95℃变性30s,58℃退火40s,72℃延伸50s,35个循环;72℃完全延伸10min.
