新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立

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1、医学研究生学报2014年2月第27卷第2期JMedPostgra，Vol．27，No．2，February，2014·129·论著(基础研究)新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立孙月，徐洪，徐丁洁，魏中秋，于婉莹，邓海静，薛新新，杜世璞，杨方［摘要］目的肌成纤维细胞(fibroblasts，FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞，以特异表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)和细胞基质沉积为特征。文中比较胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺点，并报道体外肌FB分化模型的建立。方

2、法分别采用胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB，倒置相差显微镜观察原代培养，MTT法检测细胞增殖，免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源，采用转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)诱导FB向肌FB分化。结果采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法均可以成功原代培养鼠胚肺FB，2种方法无论在形态、细胞增殖水平还是在细胞鉴定方面均无差异，但胰蛋白酶消化法在相同条件下能够快速获得较组织贴壁法更多的细胞，且2种方法获得的FB在4代之内均不表达α-SMA，需经TGF-β1诱导分化为肌FB。随TGF-β1诱导时间的延长，α-SM

3、A和Ⅰ型胶原蛋白表达上调。结论胰酶消化法较组织贴壁法能快速、大量获得纯度较高的FB，4代以内的乳鼠FB适合建立肌FB分化模型。［关键词］成纤维细胞;原代培养;肌成纤维细胞［中图分类号］Ｒ813．11［文献标志码］A［文章编号］1008-8199(2014)02-0129-04Trypsindigestionversustissueadherenceinprimarycultureoflungfibroblastsfromnewbornratsandestablishmentofamyofibroblastdifferentiationmodelinvitro1

4、123111SUNYue，XUHong，XUDing-jie，WEIZhong-Qiu，YUWan-ying，DENGHai-jing，XUEXin-xin，11DUShi-pu，YANGFang(1．MedicalＲesearchCenter，2．CollegeofTranditionalChineseMedicine，3．DepartmentofPathology，HebeiUnitedUniversity，Tangshan063000，Hebei，China)［Abstract］ObjectiveMyofibroblasts，characterizedb

5、yspecificexpressionsofα-smoothmuscleactin(α-SMA)andextra-cellularmatrix(ECM)proteins，arecriticalcomponentsoforganfibrosis．Theaimofthisstudyistocomparetrypsindigestionwithtis-sueadherenceintheprimarycultureoflungfibroblastsisolatedfromnewbornratsandestablishamyofibroblastdifferentiat

6、ionmodelinvitro．MethodsWeprimarilyculturedlungfibroblastsfromnewbornratsbytrypsindigestionandtissueadherencerespectively．Forinvitrostudies，weobservedcellmorphologyundertheinvertedphasecontrastmicroscopeanddeterminedcellproliferationandmark-ersbyMTTassayandimmunocytochemistry．Myofibr

7、oblastdifferentiationwasinducebyTGF-β1．ＲesultsLungfibroblastsfromthenewbornratsweresuccessfullyculturedbybothtrypsindigestionandtissueadherence，withnodifferenceincellmorphology，prolifera-tionandmarkersbetweenthetwomethods．However，underthesamecondition，morecellswererapidlyobtainedbyt

8、rypsindigestionthan