hepcidin在非小细胞肺癌中表达及其促进肺癌细胞增殖生长研究

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1、万方数据博士学位论文原创性声明l

2、AllIIII11[IIIl[IIllllflUFIIIIJY2688203本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：辅吼丝年』月三日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或

3、湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。⋯名：驰聊签名煎期：生年』月当万方数据摘要Hepeidin在非小细胞肺癌中的表达及其促进肺癌细胞增殖生长的研究摘要：目的：肺癌是世界上最常见的癌症，每年新发病例接近120万，同时也是男性癌症死亡的主要原因。而在女性中，肺癌是第四常见的癌症，也是癌症死亡中排名第二的主要原因．根据组织学形

4、态分类，肺癌可以被分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌两种类型，而非小细胞肺癌在原发肺癌中所占比例超过85％。铁是所有生命细胞基本活动所必需的。很多动物模型和流行病学调查表明，过量的铁是促进恶性肿瘤产生的重要原因之一。研究发现，机体内铁代谢的调控跟Hepcidin关系十分密切。Hepcidin是一种主要由肝脏合成分泌的小分子多肽，在心脏、脑、肺、胰腺等其他组织器官中也有一定的表达。人类Hepcidin由HAMP基因转录并翻译。Hepcidin主要是通过与细胞表面控制铁释放的膜铁转运蛋白Ferroportin的结合，使其被内

5、陷入细胞质中被溶酶体吞噬降解，从而抑制细胞内铁的输出。近来对于Hepcidin在肿瘤中的关系和作用越来越受重视，研究显示Hepcidin在肝细胞癌和肾细胞癌中的表达是下调的，但在结肠癌和乳腺癌中表达却升高。目前尚无相关研究报道Hepcidin与肺癌的关系，因此本课题着重于研究Hepcidin．25在NSCLC患者血液循环中的表达情况，分析Hepcidin和其相关信号通路因子IL．6及BMP在NSCLC患者中的关系；检测Hepcidin在肺癌组织标本中的表达水平，分析其与病理学特征的关系；进一步通过细胞生物学实验分析Hepcidi

6、n与肺癌细胞生长情况的关系，并且研究并初步阐明Hepcidin在肺癌细胞增殖生长过程中的作用机制。方法：采用酶联免疫法(ELISA)分别检测53例NSCLC患者和16例健康志愿者的血清Hepcidin．25、IL一6和BMP2的含量水平，分析与肺癌病理学特征之间的关系以及相互之间的关系。通过实时荧光定量PCR检测65例NSCLC患者的肺癌组织样本和正常肺组织样本中的HepcidinmRNA表达水平；同时用免疫组织化学法检测65例NSCLC组织标本和57例正常肺组织标本中Hepcidin的定位及表达情况。进一步测定了6种NSCLC

7、细胞株和支气管上皮细胞株HBE中HepcidinmRNA的表达水平，选择表达合适的H520细胞株通过细胞免疫荧光观察Hepcidin在细胞内的表达情况；构建Hepcidin真核表lI万方数据博士学位论文摘要达载体使Hepcidin在HBE细胞内过表达，运用WST．8试验和细胞平板克隆形成试验研究Hepcidin表达水平升高对细胞增殖生长的影响；同时用RNA干扰技术降低H520细胞内Hepcidin的表达，运用WST．8试验和细胞平板克隆形成试验研究Hepcidin表达水平下降对细胞增殖生长的影响；通过WST．8试验检测人工合成H

8、epcidin结合域(皿D)对H520细胞的影响，分析HBD在肺癌细胞生长过程中的作用。此外还应用荧光测量法检测Hepcidin过表达的HBE细胞和Hepcidin表达下降的H520细胞内的可变铁池(LIP)的变化，进一步阐明Hepcidin促进肺癌细胞增殖生长的机制。结果：NSCLC患者的血清Hepcidin．25显著高于健康志愿者(P=O．004)。NSCLC患者血清Hepcidin．25水平随NSCLC的淋巴结转移的发生而升高(P=O．044)；同时，血清Hepcidin．25水平还跟TNM临床分期呈正相关，随临床分期的提

9、高而升高(P=O．017)。通过进一步检测发现IL．6在NSCLC患者和健康志愿者之间没有明显差别(P=O．917)，但是发现IL一6水平在NSCLC患者中随着肺癌淋巴结转移的发生(P=O．018)和TNM临床分期的提高(P=O．041)而下降。血清BMP一2在