胰高血糖素样肽1对内皮祖细胞增殖分化能力的影响及其机制

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1、中南大学学报（医学版）２０１０，３５（１２）ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｘ．ｘｙｓｍ．ｎｅｔ１２５４ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ）胰高血糖素样肽１对内皮祖细胞增殖分化能力的影响及其机制谢晓云，莫朝晖，陈科，何红晖，谢艳红（中南大学湘雅三医院内分泌科，长沙４１００１３）［摘要］目的：探讨胰高血糖素样肽１（ＧＬＰ１）对体外培养的人外周血内皮祖细胞（ＥＰＣｓ）增殖分化能力的影响及可能的作用机制。方法：采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞，培养７ｄ后，收集贴壁细胞。贴壁细胞用不含ＦＢＳ的Ｍ１９９培养液培养２４ｈ后，分成４组：对照组和ＧＬＰ１各浓度组（１，１０，２０ｎｍｏｌ／

2、ＬＧＬＰ１共３组），分别用含０．２％ＢＳＡ，１，１０，２０ｎｍｏｌ／ＬＧＬＰ１的Ｍ１９９培养液培养７２ｈ。倒置相差显微镜下观察ＥＰＣｓ生长情况，ＭＴＴ法检测ＥＰＣｓ的增殖能力；ＲＴＰＣＲ技术检测ＥＰＣｓ中ＫＤＲ，Ｆｌｔ１，ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎ，内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达，ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清液内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）浓度，ＳＰ法检测细胞ＶＥＧＦ蛋白表达。同时用１００ｎｇ／ｍＬＶＥＧＦｍＡｂ对１０ｎｍｏｌ／ＬＧＬＰ１培养的ＥＰＣｓ进行干预。结果：与对照组比较，ＧＬＰ１各浓度组ＥＰＣｓ增殖明显（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），ＥＰＣｓ中ＫＤＲ，Ｆｌｔ

3、１，ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎ，ｅＮＯＳｍＲＮＡ表达增强，细胞上清液中ＶＥＧＦ浓度显著升高、细胞ＶＥＧＦ蛋白表达增强（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。ＶＥＧＦｍＡｂ（１００ｎｇ／ｍＬ）下调ＧＬＰ１培养的ＥＰＣｓ增殖能力，细胞ＫＤＲ，Ｆｌｔ１，ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎ，ｅＮＯＳｍＲＮＡ表达下降。结论：ＧＬＰ１对体外培养的人外周血ＥＰＣｓ的增殖和分化能力具有一定的促进作用，上调ＶＥＧＦ自分泌是其可能的作用机制之一。［关键词］胰高血糖素样肽１；内皮祖细胞；增殖；分化；血管内皮生长因子ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２７３４７．２０１０．１２．００９Ｅｆｆｅｃｔｏｆｇｌｕｃａｇ

4、ｏｎｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１ｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍＸＩＥＸｉａｏｙｕｎ，ＭＯＺｈａｏｈｕｉ，ＣＨＥＮＫｅ，ＨＥＨｏｎｇｈｕｉ，ＸＩＥＹａｎｈｏｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ＴｈｉｒｄＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００１３，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｌｕｃａｇｏｎｌｉ

5、ｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１（ＧＬＰ１）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ（ＥＰＣｓ）ｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄ．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｈｕｍａｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｂｙｄｅｎｓｉｔｙｇｒａｄｉｅｎｔｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒ７ｄａｙｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅ，ａｔｔａｃｈｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆ０．２％ＢＳＡ，ａｎｄＧＬＰ１（

6、１，１０，ａｎｄ２０ｎｍｏｌ／Ｌ）．ＬａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅＥＰＣｓｆｒｏｍｈｕｍａｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄ．ＴｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥＰＣｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｒｅｖｅｒｓｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＭＴＴｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＥＰＣｓ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＫＤＲ，Ｆｌｔ１，ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎ，ａｎｄｅＮＯＳｍＲＮＡｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＴＰＣＲ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｅｒｕｍ收稿日期（Ｄａｔｅ

7、ｏｆｒｅｃｅｐｔｉｏｎ）２０１０－０１－１３作者简介（Ｂｉｏｇｒａｐｈｙ）谢晓云，博士，医师，主要从事糖尿病血管病变研究。通信作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ）莫朝晖，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｈｕｉｍｏ＿ｘｙ＠１２６．ｃｏｍ基金项目（Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｉｔｅｍ）湖南省自然科学基金（０６ＪＪ５０３５）。ＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＨｕｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ（０