采用安捷伦液质联用技术对胶类药材进行鉴定

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1、采用安捷伦液质联用技术对胶类药材进行鉴定应用简报制药行业作者摘要胡楠左帅杜伟薄涛本文基于2015年版《中国药典》[1]中采用液质联用技术分析胶类药材的定性方法，开安捷伦科技（中国）有限公司发了稳定、快速、灵敏的三重四极杆液质联用(LC/QQQ)法和四极杆飞行时间液质联用(LC/Q-TOF)法进行阿胶、鹿角胶、龟甲胶的定性鉴别；同时，利用Q-TOF强大的化合物定性能力，结合蛋白质库，建立了特征肽段序列分析方法以及“假药”的初步定性方法。前言胶类药材是我国传统中药中一类特殊的动物药，是由动物的皮、骨骼

2、等经特殊工艺加工而成，常见的有阿胶、鹿角胶、龟甲胶及其相关中成药制剂。近年来，随着胶类药用量增长，原料资源供不应求，新闻曝光了一些不法生产企业为降低成本，采用其它动物杂皮投料，给消费者的健康带来严重隐患。为了保障公众用药安全有效，2015年版《中国[1]药典》制订了符合胶类药材特点的定性方法：采用液质联用技术，分析阿胶、鹿角胶、龟甲胶的特征肽段，方法专属性强、科学可靠。安捷伦科技公司针对这一变化开发了稳定、快速、灵敏的三重四极杆液质联用(LC/QQQ)法，进行阿胶、鹿角胶、龟甲胶的定性鉴别。同时，

3、鉴于很多实验室有高分辨质谱测试需求，我们在药典LC-QQQ方法的基础上，开发了四极杆飞行时间液质联用(LC/Q-TOF)法。此外，利用Q-TOF强大的化合物定性能力，结合蛋白质库，建立了特征肽段序列分析方法以及“假药”的初步定性方法。实验部分色谱条件色谱柱：EclipsePlusC18（2.1x100mm，1.8μm）试剂和样品材料柱温：40°C实验用色谱纯乙腈购自Merck，色谱纯甲酸购自Dikma，超纯进样体积：5µL水为Milli-Q系统制备，碳酸氢铵购自ACROS，胰蛋白酶购自流速：0.3

4、mL/minPromega。样品材料为市售阿胶、鹿角胶、龟甲胶。流动相：A：H2O含0.1%甲酸；B：乙腈梯度洗脱：0min5%B；25min20%B；40min50%B仪器Agilent1290InfinityII超高效液相色谱三重四极杆串联质谱条件Agilent6460C三重四极杆质谱仪质谱系统：Agilent6460CAgilent6530四极杆飞行时间质谱仪离子源：配备安捷伦喷射流的ESI模式：正离子样品制备雾化气：N2取样品粉末0.01g，加1%碳酸氢铵溶液5mL，超声处理30分雾化气压

5、力：30.0psi钟后，用0.22uM微孔滤膜过滤，取续滤液100μL置微量进样瓶干燥气温度：325°C中，加胰蛋白酶溶液10μL（采用序列分析用胰蛋白酶，加1%碳干燥气流量：8.0L/min酸氢铵溶液制成每1mL中含1mg胰蛋白酶的溶液，临用时配制），毛细管电压：3500V摇匀，37°C恒温酶解12小时。鞘气温度：350°C鞘气流量：12.0L/min喷嘴电压：0VDeltaEMV：0V扫描模式：MRM表1中列出了与待测物相关的MSMRM参数表1.三重四极杆串联质谱MRM参数化合物名母离子MS1

6、分辨率子离子MS2分辨率驻留时间碎裂电压(V)碰撞能量(eV)阿胶539.8Unit612.4Unit10012020阿胶539.8Unit923.8Unit10012020鹿角胶765.4Unit733.0Unit10013515鹿角胶765.4Unit554.0Unit10013520龟甲胶631.3Unit921.4Unit10012030龟甲胶631.3Unit546.4Unit100120182四极杆飞行时间质谱条件表2.四极杆飞行时间质谱目标质量数列表质谱系统：Agilent6530化

7、合物名质量价态窗口宽度碰撞能量(eV)离子源：配备安捷伦喷射流的ESI阿胶539.78622Medium20模式：正离子鹿角胶765.71082Medium15雾化气：N2鹿角胶765.71082Medium20雾化气压力：30.0psi龟甲胶631.33552Medium30干燥气温度：325°C龟甲胶631.33552Medium18干燥气流量：8.0L/min毛细管电压：3500V鞘气温度：350°C鞘气流量：12.0L/min喷嘴电压：0V扫描速度：3谱图/秒扫描模式：鉴定采用Target

8、MS/MS，未知肽段定性采用AutoMS/MS表2中列出了与待测物相关的目标质量数结果与讨论基于2015年版《中国药典》开发的LC/QQQ法分析胶类药材，重现性好、灵敏度高。阿胶、鹿角胶、龟甲胶各MRM通道信噪比均大于500，其中龟甲胶的631.3→546.4通道信噪比大于77000（如图1所示），完全能够满足2015年版《中国药典》信噪比大于3:1的要求。X1046543210X1046543210X1031.510.5012345678910111213141516171819