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1、小胶质细胞论文：小胶质细胞淀粉样蛋白寡聚体海风藤提取物阿尔茨海默病【中文摘要】阿尔茨海默病(AD)发病机理至今仍不清楚,研究者提出了多种可能的假说。其中，炎症学说在体内和体外研究中均取得了可信的证据。冃前已知，小胶质细胞能够被神经炎性斑的主要成分B淀粉样蛋白(AB)激活。迄今为止，人们尚未找到特异性治疗AD的有效方法。海风藤是一种用于治疗跌打损伤、哮喘等疾病的传统中药，最近的研究发现，海风藤提取物能够抑制B淀粉样前体蛋白(B-APP)基因的表达和AB的合成，但对小胶质细胞的异常活化是否有影响，国内外尚无类似研究。体外培养小胶质细胞，研究纤丝状
2、和寡聚体B淀粉样蛋白(3-amyloid,A3)25-35对小胶质细胞的激活作用，以及海风藤提取物对纤丝状和寡聚体AB25-35激活小胶质细胞作用的影响。方法：取新工大鼠的大脑组织，制备成细胞悬液后进行混合细胞培养，再将小胶质细胞从混合培养的细胞群中分离。以CDllb为特异性抗原标志,利用免疫细胞化学染色方法，鉴定小胶质细胞。分别用纤丝状A025-35、寡聚体A025-35、纤丝状A325-35+海风藤提取物、纤丝状AB25-35+DMSO、寡聚体AB25-35+海风藤提取物以及寡聚体AB2535+DMSO干预小胶质细胞，并设立空白对照组。干
3、预48小时后，倒置相差显微镜下观察不同处理组小胶质细胞的形态变化。以CD68作为小胶质细胞活化的特异性抗原标志，利用免疫细胞化学染色方法,对小胶质细胞的活化进行定性检测，并比较不同处理组间的差异。结果：1)通过CDllb免疫细胞化学染色，证实分离得到的细胞主要为小胶质细胞,CDllb表达阳性率达到98%,而以PBS代替一抗的阴性对照组CDllb表达阳性率仅有5.4%,P<0.05o2)干预48小时后，纤丝状A025-35及寡聚体AB25-35组小胶质细胞形态发生明显变化,胞体增大,突起回缩变短，呈阿米巴样改变，为典型的激活后小胶质细胞的形态。
4、而纤丝状AB25-35+海风藤提取物和寡聚体AB25-35+海风藤提取物组的小胶质细胞形态变化则不如上述两组明显。3)CD68免疫细胞化学染色显示，每组小胶质细胞都有一定程度的活化，但各组小胶质细胞表达CD68的阳性率不同,P<0.05o六个实验组的小胶质细胞CD68表达阳性率均高于空白对照组(5.1%),P〈0・004o寡聚体AB25-35组的CD68表达阳性率(71.2%)高于纤丝状AB25-35组(60.8%),P<0.002o纤丝状A025-35+海风藤提取物组CD68表达阳性率(52.1%)低于纤丝状A025-35组(60.8%),
5、P<0.002。寡聚体AB25-35组(71.2%)和寡聚体A025-35+海风藤提取物组(67.0%)的CD68表达阳性率无明显差异,P-0.005o结论：1)成功进行了小胶质细胞的体外分离纯化培养，该方法获得的小胶质细胞纯度高，能够满足后续实验的要求。2)证实纤丝状A025-35和寡聚体AB25-35均能激活小胶质细胞，且寡聚体AB25-35激活小胶质细胞的能力强于纤丝状AB25-35o3)排除了溶剂DMS0的影响后，证实海风藤提取物能够抑制纤丝状AB25-35对小胶质细胞的激活作用，对寡聚体A025-35的激活作用无明显影响。【英文摘要
6、】Background:ThepathogenesisofAlzheimer?sdisease(AD)stillremainsunknownnow,butseveraldifferenttheorieshavebeensuggestedbyresearchers・Theinflammationtheoryisoneofthemostpossiblemechanismssupportedbyinvitroandinvivoevidences・Theactivationofmicrogliacanbestimulatedbybeta-amyloi
7、d(AB),themaincomponentofneuriticplaques・Uptonow,thereisstillnoeffectivetherapyforAD.PiperKadsuraOhwiisakindofChineseherbaldrugtraditionallyusedtotreattraumaandasthma,etc・・RecentstudiesrevealedthatextractsofPiperKadsuraOhwimayinhibitexpressionof(3-amyloidprecursorprotein(APP
8、)geneandbiosynthesisofAB,butitseffectsontheabnormalactivationofmicrogliahavenotbee
