anxa2在视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制

《anxa2在视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、青岛大学博士学位论文ANXA2在视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制姓名：王猛申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：董晓光20120602ANXA2在视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制摘要目的通过观察ANXA2在体外高糖培养的人脐静脉内皮细胞(Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC)及氧诱导C57BL／6J小鼠视网膜新生血管中的表达，研究ANXA2对HUVEC增殖，迁移，成管能力的影响，对小鼠视网膜新生血管发育的影响，以及对新生血管相关因子表达的调控，探讨ANXA2在视网膜新生血管形成过程中的作用和机制。方法(1)体外实验应用HUVEC细

2、胞，实验分四组：正常组(Normal，常规培养)，高糖培养下的高糖对照组(Mock，无处理)、阴性干扰组(SiContr01)、阳性干扰组(SiANXA2)。应用Real—timePCR和Westernblot方法检测各实验组HUVEC中膜联蛋白A2(ANXA2)基因及蛋白的表达情况，MTT方法检测各组0h，24h，48h和72h细胞增殖能力，划痕实验观察各实验组细胞迁移能力，成管实验评估细胞的成管能力。并通过Real-timePCR检测各实验组中新生血管相关因子VEGFA，MMP2，MMP9，TIMP2的mRNA表达情况。(2)体内实验应用C57BL／6J小鼠。小鼠出生后7天，放入氧浓度7

3、5—80％氧箱内5天后取出正常环境下饲养，构建氧诱导(OIR)小鼠模型。实验分四组：正常组(Normal，正常饲养)，OIR空白对照组(Mock，无处理)，OIR阴性干扰组(SiANxA2』)、和OIR阳性干扰组(SiANXA2)。分别取正常组和OIR空白对照组出生后12，13，14，15，16，17，2l，30天小鼠，异硫氰酸标记的右旋糖酐(FD一2000S)行上腔静脉灌注，视网膜铺片，荧光显微镜对比观察氧诱导视网膜新生血管形态学变化，应用Real—timePCR检测对比两组间相应日龄小鼠视网膜ANXA2mRNA的表达变化。选择小鼠出生后17天(P17)时间点，分别提取4组中小鼠视网膜标本

4、，通过视网膜铺片方法对比观察视网膜新生血管形态学变化，Real—timePCR及Westernblot检测各组中ANXA2的表达及ANXA2基因干扰后新生血管相关因子Vegfa，Mmp2，Mmp9，Timp2的表达变化。应用SPSS软件对数据行统计学处理，应用单因素方差分析进行组间比较(P

5、P<0．05)。基因干扰后，在基因和蛋白水平均表明ANXA2在阴性干扰组表达无明显改变，在阳性干扰组表达有明显下降，SiANXA2可以成功干扰ANXA2基因的表达。ANXA2基因表达下降后，HUVEC的增殖、细胞迁移数量(41．1±1．5VS102．3±4．9)和成管数量(7．6±1．2VS17．3±1．5)显著下降，VEGFA，MMP2，MMP9，TIMP2表达明显下调(P

6、及新生血管芽减少。视网膜层次较明显。OIR空白对照组ANXA2表达显著高于正常组(P

7、2；氧诱导；视网膜新生血管；基因干扰AbstractPurpose：AssesstheproductionofANXA2inHumanumbilicalveinendothelialcells(ntrVEC)cultured埘tllllighglucoseinvitroandinoxygen-inducedretinalneovascularizationinC57BL／6Jmousemodel．Toeval