cd45单抗介导的淋巴瘤荷瘤裸鼠三步法预定位放免显像研究

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文CD45单抗介导的淋巴瘤荷瘤裸鼠三步法预定位放免显像研究Three．stepPretargetedRadioimmunoimaginginNudeMiceBearingHumanBCellLymphomabyCD45MonoclonalAntibody课题来源：广东省科技计划项目(20108060900055)及广州市科技计划项目(2010GN-E00221)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员论文评阅人影像医学与核医学汪兵李贵平主任医师林伟主任医师樊卫教授张祥松主任医师王

2、全师教授吴湖炳副主任医师2012年5月15日广州CD45单抗介导的淋巴瘤荷瘤裸鼠三步法预定位放免显像研究硕士研究生：汪兵指导老师：李贵平主任医师、副教授摘要【目的】1、建立DTPA．生物素和hlgG的99mTc标记方法，并观察99‘。ITc标记物在体内、外的稳定性及其在正常小鼠体内的分布。2、评价生物素化CD45单抗及咖Tc标记生物素在人Raji细胞移植瘤裸鼠模型中三步法预定位放免显像价值。【材料与方法】1DTPA．生物素和hlgG的99mTc标记及其在正常小鼠体内生物分布研究1．1实验动物4-6周龄昆明种小白鼠24只(雌雄

3、不限)，质量19．219，由南方医科大学实验动物中心提供。1．299mTc标记DTPA．生物素99mR标记DTPA．生物素采用直接标记法，纸层析法测定其标记率，固定相为新华1号虑纸，展开剂为丙酮和生理盐水，分别在标记后Oh、lh、3h、6h、12h采用纸层析法测定放化纯度。1．3"mTc标记hlgG99mTc标记hIgG采用巯基乙醇直接还原法，纸层析法测定其标记率，固定相为新华1号滤纸，展开剂为30％氨水：乙醇：水(1：2：5)和生理盐水，分别摘要在标记后Oh、1h、3h、6h、12h采用纸层析法测定标记率及放化纯度。1．4

4、"mTc．DTPA．生物素和99mTc．hlgG的体外稳定性实验分别取500lal的99mTc．DTPA．生物素和99mTc．MgG溶液，加入1IIll的生理盐水(NS)中，放置37℃温育箱中温育至12h，分别于1h、3h、6h、12h取样，用纸层析法测定放化纯度。1．599mTc．DTPA．生物素和99mTc．hlgG在正常小鼠体内的生物分布及显像取24只昆明种小白鼠，随机分为2组，每组12只小鼠，第一组为静脉注射99rote．DTPA．生物素组，第二组为静脉注射99mTc．hIgG簦]．。每组于尾静脉注射7．4MBq／1

5、001al的99mTc标记物后1h、3h、6h和12h各取3只小鼠分别进行体步'bSPECT显像，于显像后断颈处死，取肝、脾、肾、肺、胃、肠、肌肉、骨骼及血液，称重后在放射免疫Y计数器中测量放射性计数，经放射性衰变校正后计算各脏器的每克组织百分注射剂量率(％ID／g)。2CD45单抗介导的淋巴瘤荷瘤裸鼠三步法预定位放免显像研究2．1Raji细胞株Raji细胞株由南方医科大学南方医院血液科提供。用RPMll640培养液培养，加入10％胎牛血清，在37"C和5％C02和95％相对湿度的孵箱内孵育。2．2流式细胞仪检测Raji细胞

6、CD45表达收集对数期生长的Raji细胞，PBS洗涤2次，计数细胞，分管，106／管，加入CD45单抗，同型IgGl作为阴性对照抗体，4"C孵育30min，PBS洗涤，用流式细胞仪分析样本中阳性细胞数，计算荧光标记阳性细胞的百分率。2．3建立淋巴瘤实验动物模型(1)4．6周龄裸鼠24只(雌雄不限)，质量18—22g，由广东省实验动物中心和南方医科大学实验动物中心提供。(2)收集对数期生长的的Raji淋巴瘤细胞株并离心，生理盐水制成悬浮液(>lx108／mE)，每只裸鼠双侧臀部皮下注入0．2ml，无特定病原体(SPF级)环境下

7、饲养，待肿瘤细胞种植于裸鼠臀部皮下后，记录肿瘤成瘤时间，成瘤后每2天n硕士学位论文用游标卡尺测量肿痛最长径羽最短径b。2．4生物素化CD45单抗的制备取2mgCD45单抗，按CD45单抗：生物素酯(摩尔比)=1：30．1：50取样，在0．1MPH8．5碳酸氢钠溶液中反应(Iml)，室温下用玻璃棒轻轻搅拌l小时，将反应液注入PD．10层析柱内，放入离心器中(3000转／minx2次)离心层析。2．5采用HABAJAvidin试剂进行抗体CD45生物素化程度测定取收集的生物素化CD45单抗1001．tl，加入900ul的HABA

8、／Avidin试剂中进行反应。由于游离的生物素与HABA／Avidin发生反应约1分钟后，当反应体系的颜色由橙红色转为淡黄色时，测量其500nm的OD值。抗体生物素化程度的计算(根据HABA／Avidin试剂说明书)2．699mTc标记生物素及”mTc标记CD45单抗参见标记部分。2．7淋