ebv相关胃癌组织中cthrc1基因甲基化及表达的研究

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1、青岛大学硕士学位论文EBV相关胃癌组织中CTHRC1基因甲基化及表达的研究姓名：王新颖申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：罗兵20120602EBV相关胃癌组织中CTHRCI基因甲基化及表达的研究中文摘要EB病毒(Epstein．Ban"vires，EBV)属疱疹病毒属丫疱疹病毒亚科成员，与人类多种肿瘤的发生相关。DNA甲基化是目前最为前沿以及最受关注的表观遗传学机制，抑癌基因启动子区高度甲基化被认为是导致其功能失活进而肿瘤发生的重要原因。CTHRCl基因在血管重塑过程中可抑制TGF信号通路，减少胶原沉积并促进细胞迁移，目前

2、已在人类多种实体肿瘤组织中检测到CTHRCl基因的异常表达。目的检测EBV阳性细胞系和EBV相关胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma,EBVaGC)组织中CTHRCl基因的甲基化状态及其转录表达，并与EBV阴性细胞系和EBV阴性胃癌(EBV-negafivedgastriccarcinoma,EBVnGC)组织@CTHRCI基因的甲基化状态及其转录表达情况进行比较分析，探讨EBV感染对CTHRCl基因甲基化及其转录表达影响。方法选取EBV阳性和阴性胃癌细胞系以及EBVaGC和EBVnGC患者作为研究对象

3、，采用甲基化特异性PCR(Methylation．SpecificPC氏MSP)及亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisulfitegenomicsequencing，BGS)检测细胞和组织中CTHRCl基因启动子区域CpG岛甲基化情况。同时采用实时荧光定量PCR(Real．timequantitativePCR,real—timeqPCR)检测EBV阳性和阴性胃癌细胞系以及EBVaGC和EBVnGC组织中CTHRCl基因的表达。结果①MsP检测结果显示，4种EBV阳性胃癌细胞系PT、GT38、GT39和SNU719，以及4种EBV阴性细胞

4、系SGC7901、HGC．27、BGC．823和MKN．45均表现为M+U型；EBVaGC和EBVnGC组织中CTHRCl基因的甲基化率分别为95．4％和38．1％，统计学分析表明，EBVaGC组织中CTHRCl基因的甲基化率明显高于EBVnGC(f=16．099，P

5、基因的甲基化程度无显著性差异。③胃癌组织中CTHRCI基因甲基化率在患者不同性别、发病部位、病理分型以及有无淋巴结转移间均无显著性差异(P值均>0．05)，而在不同年龄组中CTHRCl基因甲基化率有显著性差异(f=8．972，P=0．03)。④qPCR检测结果显示，EBVaGC和EBVnGC组织中CTHRCl基因表达的ACt值分别为10．30士4．24和5．364-3．60，两组数据经2伽转换后进行统计学分析，EBVnGC组织中CTHRCl基因的转录表达明显高于EBVnGC，差异有显著性忙．2．38，P---0．022)。⑤胃癌组织

6、中CTHRCl基因的表达在性别、年龄及淋巴结有无转移中无显著性差异(P值均>O．05)。{l㈣嬲结论@EBVaGC组织中CTHRCl基因的甲基化率明显高于EBVnGC组织，表明EBV感染可能是导致CTHRCl基因调控区域甲基化的重要原因，可能为EBV参与EBVaGC发生的一种机制。②EBVaGC组织中CTHRCl基因的转录表达明显低于EBVnGC组织中CTHRCl基因的转录表达，提示EBV感染可能通过诱导EBVaGC组织中CTHRCl基因的甲基化下调其转录表达，从而可能参与EBVaGC的发生。③EBVaGC组织中CTHRCl基因甲基

7、化率明显高于EBVnGC组织，而EBVnGC组织中CTHRCl基因的转录表达水平明显高于EBVaGC，推测CTHRCl基因介导的信号传导通路可能在EBVaGC的发生发展中起负性调控作用，但具体调控机制有待进一步研究阐明。硕士研究生王新颖(病原生物学)指导导师罗兵教授关键词：EB病毒；胃癌；甲基化；CTHRCl基因StudyofCTHRC1geneonmethylationandexpressioninEpstein-·BarrVirus·-associatedGastricCarcinomaAbstractEpstein．Barrv

8、irus(EBV)isagammaherpesvirusandassodateswithmultiplehumantumors．DNAmethylationisthemostcutting-edgeepigeneticmechanis