eb病毒相关胃癌组织中的tmem130基因甲基化状态与表达的研究

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1、EB病毒相关胃癌组织中TMEMl30基因甲基化状态与表达的研究中文摘要EB病毒(Epstein．Barrvirus，EBV)是公认的DNA致瘤病毒，EBV感染诱导抑癌基因启动子区高甲基化被认为是EBV相关肿瘤抑制基因功能失活的关键机制。EBV感染与胃癌的关系已经得到确认，但EBV相关胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma，EBVaGC)的发病机制有待于深入研究。目的探讨EBV感染对TMEMl30基因启动子区甲基化状态及其转录表达的影响，为进一步研究TMEMl30基因在EBV

2、aGC发生中的作用机制提供实验基础。方法采用甲基化特异性PCR(Methylation．SpecificPCR，MSP)及基于焦亚硫酸氢盐修饰的基因组测序法(Bisulfitegenomicsequencing，BGS)检测EBV阴性和阳性胃癌细胞系以及EBVaGC和EBVnGC(EBV-negativedgastriccarcinoma，EBVnGC)组织中TMEMl30基因启动子区甲基化状态，并比较TMEMl30基因甲基化率与胃癌标本临床病理特征的关系。同时采用实时荧光定量PCR(Real．tim

3、equantitativePCR)检测EBVaGC和EBVnGC组织中TMEMl30基因的转录表达情况。结果@MSP．结果显示4种EBV阳性胃癌细胞系PT,GT38，GT39和SNU719以及5种EBV阴性胃癌细胞系SGC7901，HGC-27，BGC-823，AGS和MKN-43中TMEMl30基因启动子区均成M+U型。@EBVaGC病例癌组织和相应癌旁组织中TMEMl30基因启动子的甲基化率分别为87．7％(43／49)币122．6％(7／31)，统计学分析表明，EBVaGC组织中TMEMl30基

4、因启动子的甲基化率明显高于相应癌旁组织()c：2：20．56，P

5、基化率明显高于EBVnGC(x2=5．88，P=0．018)。@BGS结果显示同一胃癌组织标本中TMEMl30基因启动子的58个CpG位点呈现不同的甲基化状态，不同组织标本间甲基化程度存在一定的差异；其中17例EBVaGC组织中TMEMl30基因启动子区有更多的CpG位点呈现甲基化状态，总体甲基化程度高于17例EBVnGC。(亘)TMEMl30基因启动子区是否发生甲基化与患者性别、年龄、肿瘤直径大小、肿瘤浸润深度、组织学分化程度以及有无淋巴结转移均无明显关系，仅与是否存在EBV感染有关(聋值=14．2

6、78，P<0．005)。@TMEMl30基因的转录表达水平在两组胃癌样本间存在一定的统计学差异(仁．2．619，P=0．01)。经2计算AACt=ACt阳性组．ACt阴性组=2．14，提示EBVaGC与EBVnGC组织中TMEMl30基因转录表达的差异倍数为2以△C‘=0．227，说明EBVaGC癌组织中TMEMl30基因mRNA转录表达水平估值为EBVnGC的0．227倍，即EBVnGC癌组织中的表达水平是EBVaGC的4．41倍。@MSP结果显示TMEMl30基因为甲基化状态的EBVaGC组织中T

7、MEMl30基因的转录表达水平明显低于非甲基化状态的EBVaGC组织标本(t：．3．03，P=0．011)，两者的差异表达倍数约为O．122，即EBVaGC样本中未甲基化标本中TMEMl30基因的表达是高甲基化标本的8．20倍。而在EBVnGC标本中甲基化样本与非甲基化样本两者之间的差异倍数为0．452，即未甲基化EBVnGC癌组织中TMEMl30基因的表达仅是高甲基化标本的2．21倍(t．．2．01，P=0．027)。结论胃癌组织中存在TMEMl30基因启动子区的异常甲基化，EBV感染可进一步诱导T

8、MEMl30基因启动子区的高甲基化，并通过高甲基化导致EBVaGC组织中下调TMEMl30基因的转录表达，进而在EBVaGC的发生发展中发挥一定作用。硕士研究生：胡顺霞(病原生物学)指导导师：罗兵教授关键词：EB病毒；EBV相关胃癌；EBV阴性胃癌；DNA甲基化；TMEMl30基因StudyofTMEMl30geneonmethylationstausandexpressioninEpstein-—BarrVirus-·associatedGastric