rap1gap下调宫颈癌细胞-基质粘附机制的研究

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1、RaplGAP下调宫颈癌细胞一基质粘附机制的研究计：学位论文：36页表格：0个插图：6幅梁晓爽指导教师：赵春艳教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：临床检验诊断学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明／f舢Y删2删2舢8舢3M聊0胛9舢8删本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我

2、一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：鎏受豳签字El期：业年』月卫日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯OOOOOOO⋯⋯OOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)日IJ舌”‘一”““””””⋯⋯一”⋯⋯⋯⋯””””“5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OoOoOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结

3、果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOOOOOO0O013(四)讨论⋯⋯⋯OOOIOO⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32四、致谢···········································································

4、36Rap1GAP下调宫颈癌细胞一基质粘附机制的研究硕士生姓名：指导教师：专业名称：梁晓爽赵春艳教授,15断学摘要目的：探讨抑癌基因RaplGAP对宫颈癌Hela细胞中Src活性的影响，以期阐明RaplGAP抑制宫颈癌Hela细胞．基质粘附的分子机制，为揭示宫颈癌发生发展的分子生物学机制提供理论依据。宫颈癌(CarcinomaofCervix)是妇女常见的恶性肿瘤。据WHO报道世界每年宫颈癌新发病例约有46万，其中我国每年新发病例约有lO万，约占1／5。宫颈癌在妇女恶性肿瘤死亡原因中居于第二位，肿瘤的转移是大多数肿瘤患者死亡的主要原因。癌细胞之间的粘附力下降而与细胞基质的粘附

5、力增强是癌细胞向远处组织侵袭的先决条件。小G蛋白Rapl具有明显调节细胞粘附的作用，在调节整合蛋白介导的细胞基质粘附和钙粘蛋白介导的细胞间的粘附中起着重要作用。抑癌基因RaplGAP(RaplGTPase．activatingprotein)是Rapl的负性调节因子，RaplGAP下调能够使细胞．基质、细胞．细胞之间粘附的改变。抑制RaplGAP表达可以增强细胞．基质粘附，而细胞之间的粘附减弱，与多种肿瘤的发生发展密切相关。非受体酪氨酸蛋白激酶Sre可通过CRK和C3G调节Rapl的活性。研究表明，沉默RaplGAP表达后Src磷酸化增强，使细胞．细胞之间的粘附力下降而细胞．

6、基质之间的粘附力增强，从而促进肿瘤细胞的转移。本组前期实验研究显示，RaplGAP在宫颈癌组织中表达下调，过表达RaplGAP可以通过抑制细胞．基质粘附进而抑制宫颈癌Hela细胞的迁移和侵袭，并发现RaplGAP可以形成同源二聚体。将与二聚体形成有关的保守氨基酸位点(第90位酪氨酸和第99位组氨酸)分别进行点突变，得到RaplGAP二聚体缺失突变体M90和M992。二聚体现象在细胞信号转导中发挥着重要作用。为了探讨RaplGAP在宫颈癌发生发展中的作用机制，本文通过在宫颈癌细胞系Hela细胞中过表达RaplGAP及其二聚体突变体，探讨该基因及其二聚体对Src磷酸化的影响，以期

7、阐明RaplGAP调控细胞．基质之间粘附作用的分子机制。方法：1．制备RaplGAP野生体及突变体M90、M992质粒。2．采用脂质体转染法对宫颈癌Hela细胞和HEK293细胞进行转染。3．荧光显微镜观察转染效率并采用Westemblot检测外源基因在细胞中的蛋白表达情况。4．Westernblot方法观察过表达RaplGAP对细胞Src蛋白磷酸化的影响。结果：1．获得了RaplGAP野生体及突变体M90、M992质粒。2．成功将卯P、RaplGAP野生体及突变体M90、M992质粒转染入Hela细胞