stim1stim2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及免疫功能的影响

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1、中图分类号：R392.12;Q2;R593.2硕士学位论文STIM1/STIM2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及免疫功能的影响院（系）、所临床医学院研究生姓名文津学科、专业内科学导师姓名刘毅教授二Ο一二年四月1目录1STIM1/STIM2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及免疫功能的影响………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………61.3前言……………………………………………………………91.4实验流程简图………………………………………………

2、…151.5材料与方法……………………………………………………161.6结果……………………………………………………………271.7讨论……………………………………………………………351.8结论……………………………………………………………401.9参考文献………………………………………………………412英汉缩略词对照表……………………………………………443致谢……………………………………………………………464泛素蛋白酶体系统与自身免疫性疾病（综述）……………475系统性红斑狼疮合并纵向脊髓炎一例………………………592STIM1/STIM2对人外周血单

3、核细胞来源的树突状细胞表型及免疫功能的影响摘要目的：深入探讨STIM1/STIM2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞（DCs）表型及免疫功能的影响，包括形态学、细胞表型、吞噬功能及刺激淋巴细胞增殖的能力，以期揭示STIM1/STIM2在自身免疫性疾病（AID）发病机制中的重要作用。方法：取正常人外周血密度梯度离心法及连续贴壁法分离单核细胞，细胞因子重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导分化获得DCs。采用核醣核酸干扰（RNAi）技术，脂质体法将STIM1siRNA与STIM2siRNA分

4、别转入DCs并设立对照，即对照组、DCs-iSTIM1组、DCs-iSTIM2组。（1）倒置相差显微镜、透射电镜（TEM）及扫描电镜（SEM）下观察比较各组DCs在形状、大小、突起、细胞超微结构等方面的形态学差异；（2）采用直接免疫荧光标记法及流式细胞仪（FCM）技术鉴定各组DCs表型HLA-DR、CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40表达阳性的细胞百分比和平均荧光强度值，以分别比较DCs-iSTIM1组、DCs-iSTIM2组与对照组之间HLA-DR、CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40表达量及平均荧光强度的差异；（3）将DCs与FIT

5、C-葡聚糖微球（dextran）相互作用，采用FCM检测PE-CD11c和FITC-dextran双阳性细胞占CD11c阳性细胞百分比，对比各组DCs对dextran的吞噬能力，以评价干扰STIM1或STIM2对DCs吞噬能力的影响；（4）诱导DCs同种异体混合淋巴细胞反应（MLR），3四甲基偶氮唑盐（MTT）细胞增殖检测实验测定各组淋巴细胞增殖情况，比较各组之间OD值的差异以评价干扰STIM1或STIM2对DCs刺激淋巴细胞增殖能力的影响。结果：（1）TEM观察下，与对照组相比，DCs-iSTIM1组和DCs-iSTIM2组DCs的细胞突触更细、多、长，部分

6、可见突起相互交叉成网格状；肿胀线粒体数目增多，肿胀程度增加，甚至出现小空泡状结构；但是，在倒置相差显微镜和SEM观察下，三组之间的DCs形态学表现无明显差异；（2）FCM检测细胞表型HLA-DR、CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40阳性细胞的百分比及平均荧光强度值。DCs-iSTIM1组与DCs-iSTIM2组共刺激分子CD83、CD80、CD86、CD40的表达量较对照组显著增加（CD83、CD80、CD86检测中P值<0.01，CD40检测中P值<0.05），而共刺激分子CD1a与MHCΠ类分子HLA-DR的表达量无明显差异；但HLA-DR的平

7、均荧光强度在DCs-iSTIM1组与DCs-iSTIM2组均明显增强（P值<0.05）；（3）FCM检测荧光双阳性细胞占FE-CD11c阳性细胞百分比结果显示，干扰STIM1或STIM2后DCs的吞噬功能较对照组有明显降低（P值<0.05）；（4）MTT比色法检测MLR中各组细胞的OD值，结果显示干扰STIM1或STIM2能显著增强DCs刺激淋巴细胞增殖的能力，以DCs与淋巴细胞混合比例为1:5和1:1最明显（P值均<0.01）。结论：（1）STIM1/STIM2缺陷能够改变DCs形态学表现：干扰STIM1或STIM2诱导DCs的细胞突起更细、多、长，可能与S

8、TIM1或STIM2缺陷能促进DCs成