苯并[a]芘诱导稀有鮈鲫细胞凋亡的研究

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1、华中农业大学硕士学位论文苯并[a]芘诱导稀有鮈鲫细胞凋亡的研究姓名：饶海鸥申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：王卫民201206苯并【a】芘诱导稀有约鲫细胞凋亡的研究苯并[a]芘诱导稀有觞鲫细胞凋亡的研究摘要细胞凋亡是调控机体发育和维护内环境稳定的重要机制。本文以我国特有实验鱼类稀有绚鲫(Gobiocyprisrants)为研究材料，通过短期半静态换水式暴露实验(28d)，研究了BaP引起的稀有觞鲫肝、肠和鳃的组织病理学变化情况；初步探讨了在活体实验中，BaP对稀有购鲫细胞凋亡的影响；采用Real．timePCR定量方法，探讨了BaP对稀有晌鲫肝脏

2、组织中细胞凋亡线粒体途径关键基因的调控作用。主要研究成果归纳如下：1稀有煮甸鲫细胞凋亡线粒体途径关键基因的克隆及序列分析从稀有绚鲫肝脏组织中同源克隆了bcl-2、apaf-1、caspase．3和caspase一9基因的部分cDNA片段，并进行了序列分析。结果表明，caspase．3和caspase一9基因片段与唐鱼(Tanichthysalbonubes)相对应的核苷酸序列同源性最高，bcl-2、ap妒J，基因片段分别与绚鱼(Gobiogobio)、鲤鱼(Cyprinuscarpio)相对应的核苷酸序列同源性最高。基于稀有绚鲫和已知物种的caspase

3、．3基因核苷酸序列构建了系统发育树，结果表明稀有绚鲫与唐鱼、斑马鱼(Brachydaniorerio)的亲缘关系最近，而与金头鲷(Spartlsaurata)、红鳍东方鲍(Fugurubripes)的亲缘关系较远。2BaP引起稀有惫甸鲫的组织病理学变化采用HE染色法(Hematoxylin—eosinstaining)检测了稀有购鲫肝、肠和鳃的组织病理学变化。结果表明，不同浓度的BaP可导致稀有绚鲫肝、肠和鳃出现不同程度的组织病理学变化，主要表现为：肝细胞体积增大、排列疏松、细胞核固缩、碎裂等；肠粘膜层杯状细胞明显增多并出现大量空泡细胞，部分纹状缘脱落等

4、；鳃丝上皮细胞增生，鳃小片融合等。3BaP对稀有囊f0鲫细胞凋亡的影响采用TUNEL法(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)进行细胞凋亡原位检测，研究了不同浓度(1．0pg／L、5．0“g／L、20．0烬／L、80．0鹏几)的BaP对稀有胸T华中农业大学2012届硕士研究生学位论文鲫细胞凋亡的影响。TUNEL凋亡原位检测结果表明，BaP可引起稀有觞鲫肝脏细胞出现明显的凋亡现象，而对肠和鳃组织中细胞凋亡没有明显影响。肝脏细胞凋亡率与浓度之间呈明显的剂量-效应关系，低浓度(1．0“g／L、5．0pg／L)处理组与对照组相比没有显

5、著性差异(p>o-D5)，高浓度(20烬／L、80gg／L)处理组细胞凋亡率明显增加，与对照组相比，差异显著(pD．D5)，高浓度组(5．0“g／L、20．0pg／L、80．0“g／

6、L)与对照组相比差异显著(pD．05)。线粒体通路关键基因的表达情况表明可能多种机制参与了BaP对稀有绚鲫肝脏细胞凋亡的诱导，

7、并非唯一的capase依赖性通路，BaP诱导稀有觞鲫肝脏细胞凋亡过程中导致了线粒体功能的紊乱，包括激活cyplal、p53、bcl-2、box和caspase一9基因，而抑制了印妒J基因的表达。关键词：苯并[a】芘；稀有购鲫；细胞凋亡；TUNEL；基因克隆及序列分析；组织病理学；基因表达；Il苯并【a】芘诱导稀有鲍鲫细胞凋亡的研究lnV1VOstudlesOnapoptomsinCioOtocyprtsT●●●●●J1T●rarusinducedbyBaPAbs仃actApoptosisiscriticallyimportantfornormaldeve

8、lopmentandhomeostasisoftheorganism，andal