非病毒载体介导转基因鸡的初步研究

《非病毒载体介导转基因鸡的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河南农业大学硕士学位论文非病毒载体介导转基因鸡的初步研究姓名：王鹤申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：王彦彬；康相涛201206河南农业大学2012届硕二L研究生论文中文摘要非病毒载体相比病毒载体具有一些优势：耐受性、相关的自身缺陷或诱导中和抗体反应性及载体构建和鉴定的简便性。实验利用流体力学注射法、肌肉注射法和睾丸注射法三种方法以非病毒载体进行转基因鸡研究，在基因治疗、基冈疫苗及转基因鸡生产上有一定的指导意义。1．流体力学注射法：10％体重pCAG—EGFP质粒(40～100t-tg)快速静脉注射6～10日龄小公鸡(10～】5s

2、内完成)。利用荧光显微镜观察、PCR及免疫纲化法鉴定811、1d、3d、5d心、肝、脾、肺、肾组织内EGFP基闪的表达，结果显示8h肝、脾、肺、肾均检测到EGFP，但很快消火。并且8

3、1心、肝、脾、肺、肾绸织基冈组DNAPCR检测为阴性，说明EGFP术整合剑鸡基冈绸上。此方法对鸡肝脏基冈功能获得或缺火快速研究提供了一个有力的『：具。2．肌肉注射法：6～10日龄小公鸡左腿肌肉注射pCAG—EGFP质粒40～100}-LpdX。利用荧光显微镜观察、PCR利免疫组化法鉴定811、1d、3d心、肝、脾、肺、肾绸织内EGFP基冈的表达，结果显示8h

4、月千、肾组织内检测到EGFP的表达，随即消火。且其PCR结果为阴性，说明EGFP木整合剑鸡基因组上。此方法对快速简便的基冈治疗提供了一种可能。3．睾丸注射法：18周龄体重相近、健康公鸡睾丸内注射801』gpCAG．EGFP与脂质体混合物。转染48h后，利_}_}j免疫组化法检测翠丸2R纵内EGFP基冈的表达，结果为

5、j11J眭，说明EGFP基冈在睾丸组织内成功地表达；但是30、60、70d精液PCR均术检测到EGFP。导致该结果可能由丁-精子生成时质粒丢失或被内源性DNases的降解。尽管睾丸注射法重复性著，但其仍有一定的优势。关键词：1

6、r病毒载体；流体力学注射法；肌肉注射法；睾丸注射法；鸡2河南农业大学2012届硕士研究生论文AbstractNon—viralvectorscomparedtotheviralvectorshavesomeadvantages：tolerability、relatedtotheir0wnshortcomingsorinductionofneutralizingantibodyreactivityandthesimplicityofvectol‘constructi013andidentification。Itutilizedthet11l

7、^eemethodsofhydrodynamicsinjection．intramuscularinjectionandtesticularinjectionf、Ortheresearchoftransgenicchickenwith11011一viralvect01，S．whichhascertainguidingsignificaneeforgcnetheraPY，geneticvaccinesandtl‘allsgenicchickel3pl’oduction．1．hydrodynamicsinjectionmethod：Itis1

8、0％weightpCAG—EGFPplasmid(40～10099)thatrapidlyiljectedintotheveinof6～10day．oldcockel·elf1O～15s)．ItidentifiedtheEGFPexpressionofheart，liver，spleen．1ungandkidneytissueswhichweresampledat8h，1d，3dand5dbyfluorcscel3Ce111iCl’oscopyobservation，PCR，andilllnlunohistochemistrymethod

9、．TheresuItsshowedthatitdetectedtheexpl·essionofEGFPinliver，spleen，1ungandkidneyat81a，butsoondisappcal’ed．AndthegenomicDNAPeRtestofheart，liver，spleen，lungandkidneytissuesat811wasnegat。tve，whichshowedthatEGFPisnotinte91’atedintothechickellgenonle。Thismethodpl‘ovidesapowelfu

10、ltoolfollt11Cquicldystudyongain—andloss—of-fimctionofthechickenliver．2．itmlanluscu]al‘il!jection