《显微摄影技术》PPT课件

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1、显微摄影技术廖继东电话：02085225841E-MAIL:tliaojd@jnu.edu.cn什么是显微摄影？显微摄影：利用摄影装置（传统相机、数码相机、专用CCD等）拍摄显微镜视野中所观察到的物像。影像质量取决于：样本制作质量；显微镜光学性能；摄影装置性能；操作者技术水平。内容光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜主要光学部件及性能与显微摄影有关的基本光学概念显微摄影系统的基本构成显微摄影基本操作程序影响显微成像质量的因素光学显微镜种类及结构特征按照其光路结构、分辨模式：正置显微镜倒置显微镜体视镜偏光镜等；按照其照明光源性质：可见光（明视场、弱视场）荧光（紫外、红外）显

2、微镜激光共聚焦显微镜光谱显微镜；按机械部件的控制方式：手动电动和全自动显微镜。光学显微镜的种类及结构特征明视场（可见光）照明光源采用普通灯泡或卤素灯，主要用于常规染色组织标本的观察：组织化学染色样本免疫组织化学染色样本；弱视场包括相差（又称相忖）、霍夫曼、微分干涉和偏光等，照明光源与明视场通用，但在光路上插入不同的光学部件，降低背景光强度，增强被观察物体的光反差，提高对透明样本的观察能力，主要用于活组织未染色样本的观察。光学显微镜的种类及结构特征荧光显微镜：照明光源采用汞灯或高能氙灯，通过不同的滤光片组合获得不同波段的激发/发射光，用于荧光染色标本的观察。由于冷光源技术（

3、金属卤素灯）的开发及荧光蛋白技术的日臻成熟，已逐渐克服了强光源对组织的灼伤及活组织荧光显色等技术瓶颈，使荧光显微技术在活组织样本观察中获得了广泛的应用。光学显微镜的种类及结构特征激光共聚焦显微镜：利用单色高能激光对观测样本进行逐点、多焦面扫描，通过计算机处理合成高清晰图像。光谱显微镜：采用多滤片组合或分光技术，获得连续激发/发射光谱，用于荧光扫描、荧光萃灭、荧光能量转移等细胞动力学观察内容光学显微镜的种类及结构特征光学显微镜主要光学部件及性能与显微摄影有关的基本光学概念显微摄影系统的基本构成显微摄影基本操作程序影响显微成像质量的因素光学显微镜主要光学部件及性能透镜及其性能

4、显微镜成像原理影响成像的关键因素—相差主要光学部件及性能光学显微镜相关参数透镜及其性能透镜（lens):透镜是由透明物质（如玻璃等）制成的一种光学元件。透镜是折射镜，其折射面是两个球面，或一个球面一个平面。它所成的像有实像也有虚像。透镜一般可以分为两大类：凸透镜和凹透镜。中央部分比边缘部分厚的叫凸透镜，有双凸、平凸、凹凸三种；中央部分比边缘部分薄的叫凹透镜，有双凹、平凹、凸凹三种。凸透镜具有会聚光线的作用，所以也叫会聚透镜。凹透镜具有发散光线的作用，所以也叫发散透镜。透镜是组成显微镜光学系统的最基本的光学元件，物镜、目镜及聚光镜等部件均由单个或多个透镜组成。虚像/实像：光

5、线通过凹透镜后，成正立虚像，而凸透镜则成正立实像。实像可在屏幕上显现出来，而虚像不能。焦点与焦平面：当一束平行于光轴的光线通过凸透镜后相交于一点，这个点称“焦点”；通过交点并垂直光轴的平面，称“焦平面”。焦点有两个，在物方空间的焦点，称“物方焦点”，该处的焦平面，称“物方焦平面”；反之，在像方空间的焦点，称“像方焦点”，该处的焦平面，称“像方焦平面”。光学显微镜主要光学部件及性能透镜及其性能显微镜的成像原理影响成像的关键因素—相差主要光学部件及性能光学显微镜相关参数显微镜的成像原理a.当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在像方二倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实像；b.

6、当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在像方二倍焦距上形成同样大小的倒立实像；c.当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在像方二倍焦距以外形成放大的倒立实像；d.当物体位于透镜物方焦点上时，则像方不能成像；e.当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也无像的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚像。显微镜的成像原理就是利用上述（c）和（e）的规律把物体放大的。当物体处在物镜前F-2F（F为物方焦距）之间，则在物镜像方的二倍焦距以外形成放大的倒立实像。在显微镜的设计上，将此像落在目镜的一倍焦距F1之内，使物镜所放大的第一次像（中间像），又被目镜再一次放大，最

7、终在目镜的物方（中间像的同侧）、人眼的明视距离（250mm）处形成放大的直立（相对中间像而言）虚像。因此，当我们在镜检时，通过目镜（不另加转换棱镜）看到的像于原物体的像，方向相反。光学显微镜主要光学部件及性能透镜及其性能显微镜的成像原理影响成像的关键因素—相差主要光学部件及性能光学显微镜相关参数影响成像的关键因素—相差色差（Chromaticaberration）：色差是透镜成像的一个严重缺陷，发生在以多色光为光源的情况下，单色光不产生色差。白光由红橙黄绿青蓝紫七种组成，各种光的波长不同，所以在通过透镜时的折射率也不同，这样物