灵芪蠲肝胶囊含药血清对活化的大鼠肝星状细胞凋亡的影响

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1、灵芪蠲肝胶囊含药血清对活化的大鼠肝星状细胞凋亡的影响摘要目的：观察灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板衍化生长因子(platelet-derivedgrowthfactor，PDGF)诱导的活化大鼠肝星状细胞-T6(hepaticstellatecell-T6，HSC-T6)的凋亡的影响，并观察其对bcl-2、bax、TIMP-1、MMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响，探讨其可能的抗肝纤维化机制。方法：1.制备含药血清：SD大鼠30只，随机分为3组，每组10只，分别用生理盐水(A组，10ml/kg)，复方鳖甲软肝片药液(B组，1

2、.5g/kg)，灵芪蠲肝胶囊药液(C组，4.25g/kg)灌胃7天，经腹主动脉采血，静置、离心、灭活、过滤，取得含药血清。2.以PDGF10ng/ml刺激HSC-T6活化。将各组含药血清按200ml/L分别作用于HSC-T6，0、12、24、48h后用流式细胞仪检测各组HSC-T6凋亡情况以及bcl-2、bax的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测24h时各组上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原、TIMP-1、MMP2浓度量表达。3.统计学处理：计量资料数据均采用均数±标准差（x±s）来表示。采用SPSS13.0统计软件，分析

3、各处理因素的主效应,采用析因设计方差分析交互效应，方差齐性检验后对多组间的比较采用单因素方差分析，组间的两两比较采用S-N-K法或Dunnett法，P<0.05为差异有统计学意义。结果：1.对HSC-T6凋亡的影响：固定时间，各干预因素单独效应及多重比较显示：12、24、48h，B、C组分别与A组比较，细胞凋亡率出现明显升高，有显著性差异（P<0.05），而B、C两组-1-间的比较无明显性差异（P>0.05）。固定分组，各时间因素单独效应及多重比较显示：除A组外，B、C组在不同时间点的两两比较均有显著差异，细胞凋亡率

4、随时间的延长出现明显上升。2.对bcl-2表达的影响：固定时间，各干预因素单独效应及多重比较显示：12、24、48h，B组、C组分别与A组比较，bcl-2的表达均出现明显下降，有显著性差异（P<0.05），而B组与C组间的比较无明显性差异（P>0.05）。固定分组，各时间因素单独效应及多重比较显示：除A组外，B组和C组在不同时间点的两两比较均有显著差异，bcl-2的表达在0h表达最高，随时间的延长整体表现为下降趋势。3.对bax表达的影响：固定时间，各干预因素单独效应及多重比较显示：12、24、48h，B组、C组分别

5、与A组比较，bax的表达均出现明显上升，有显著性差异（P<0.05），而B组与C组间的比较无明显性差异（P>0.05）。固定分组，各时间因素单独效应及多重比较显示：除A组外，B组和C组在不同时间点的两两比较均有显著差异，bax的表达随着时间的延长，整体表现为上调趋势。4.对TIMP-1、MMP2及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响：与A组比较，B、C组TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型胶原均下降，有显著统计学差异(均P<0.01)；B、C组间TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达无统计学差异(P>0.05)。与A组比较，B、C组MMP2明显增高，有

6、显著统计学差异(均P<0.01)；与B组比较，C组MMP2表达量高，但无统计学差异(P>0.05)。结论：1.灵芪蠲肝胶囊可以诱导活化的HSC-T6凋亡，且作用具有时间依赖性。其诱导凋亡的机制可能为影响bcl-2/bax表达失衡；2.灵芪蠲肝胶囊能降低TIMP-1在活化的-2-HSC-T6中的表达，而促进MMP2分泌。3.灵芪蠲肝胶囊能减少活化的HSC-T6分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原。总之本研究表明灵芪蠲肝胶囊可以通过影响bcl-2/bax表达失衡而介导活化的大鼠肝星状细胞凋亡，并且最终导致细胞外基质分泌减少以及降解因素

7、增强，从而发挥其抗肝纤维化作用。关键词：肝纤维化；血清药理学；凋亡；bcl-2；bax；Ⅰ、Ⅲ型胶原；-3-EffectsofLingQiJuanGanCapsuleMedicatedSerumonApoptosisoftheActivatedRatHepaticStellateCellAbstractObjective:ToinvestigatetheeffectsofLingQiJuanGanCapsulemedicatedserumontheapoptosisandtheexpressionofBCL-2,BA

8、X,tissueinhibitorofmetalloproteinase-1(TIMP-1)proteins,matrixmetalloproteinase-2(MMP2),andcollagentypeⅠ/Ⅲinhepaticstellatecell-T6(HSC-T6)inducedbyplatelet-derivedgrowthfacto