肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的影响-论文.pdf

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1、Websitehttp：／／xuebao．ahtcm．edu．cnE—mailahxbbjb@163．com安徽中医药大学学报第33卷第2期2014年4月JANHUIUNIVCHINESEIVIEDVo1．33No．2Apr．201463肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的影响张娟，谢道俊，韩辉，沈斌。，鲍远程，童建兵，周磊，杨波，丁伟军(1．安徽中医药大学第一附属医院神经内科，安徽合肥230031；2．湖北中医药大学，湖北武汉430065)[摘要]目的观察肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepaticstellatecells，

2、HSC)凋亡的影响，探讨肝豆灵防治Wilson病肝纤维化的作用机制。方法将75只大鼠分成空白组、模型组、肝豆灵组、青霉胺组及肝豆灵+青霉胺组，采用喂食硫酸铜饮食复制铜负荷大鼠模型，采用TuNEL法检测HSC的凋亡。结果模型组可见大量HSC增生；与模型组比较，各治疗组HSC数量显著降低(P<0．01)，HSC凋亡指数显著升高(P<0．01)；肝豆灵+青霉胺组AI显著高于肝豆灵组和青霉胺组(P<0．01)。讨论肝豆灵可促进铜负荷大鼠HSC的凋亡，其与青霉胺联合用药的作用更显著。[关键词]肝豆状核变性；肝纤维化；铜负荷；肝星状细胞；肝豆灵；青霉胺[

3、中图分类号]R575．24[文献标志码]A[DOI]IO．3969／j．issn．2095—7246．2014．02．023Wilson病(wilson’Sdisease，WD)作为铜代谢1．3试剂和药物二氨基联苯胺(diaminobenzi—障碍性疾病，其发生肝脏病变的根本原因是肝细胞dine，DAB)：北京中山生物技术公司；末端脱氧核苷中ATP7B酶功能缺陷，不能将多余的铜离子从细酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal胞内转运出去，造成游离铜在肝组织内缓慢蓄积。dexynucleotidyltransferase(TdT)一

4、mediateddUTP肝脏是铜代谢的中心器官，过度沉积的铜损害肝细nickendlabeling，TUNEL)试剂盒：美国Roche公胞，引起肝细胞变性坏死、炎性改变及肝纤维化，临司；硫酸铜：天津巴斯夫化工公司；肝豆灵成药(院药床表现为活动性坏死后肝硬化或代偿性肝硬变。研制字Z20050071)：每片0．3g，安徽中医药大学第一究证实肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSC)的附属医院制剂室提供；阳性药物青霉胺(国药准字激活是肝纤维化发生的主要环节，激活的HSC大H31022286)：每片0．125g，上海信谊药厂有限公

5、司量增殖，发生表型改变、分泌过多的细胞外基质(ex—生产。tracellularmatrix，ECM)沉积于肝脏是肝纤维化形2方法成的关键[1]。WD肝纤维化引起的肝功能衰竭通常2．1模型复制和分组75只大鼠随机分为5组，是WD患者死亡的主要原因。因此，重视对WD肝每组15只，分别为空白对照组、模型对照组、肝豆灵纤维化的早期干预，对于改善WD患者的肝功能及组、肝豆灵加青霉胺组、青霉胺组。从实验第1天开预后都具有十分重要的意义。本实验采用肝豆灵治始，除空白对照组予以普通饲料，其余4组均参照文疗WD大鼠肝纤维化，旨在研究此方对HSC凋亡献[2]复

6、制铜负荷大鼠模型，即给予含硫酸铜1g／kg的影响，以探讨其治疗WD肝纤维化的作用机制。的饲料和0．185硫酸铜的水，饲养12周。各组大1材料鼠每天每只进食相等，并自由饮水。从第7周第11．1动物实验用清洁级Wistar大鼠75只，雌雄天开始各治疗组大鼠均予以相应药物灌胃。肝豆灵各半，月龄均为3个月，平均体质量(200±20)g，购组大鼠按受肝豆灵0．486g／kg(相当于成人临床用于南京医科大学实验动物中心，实验动物生产许可量的6．3倍)灌胃，肝豆灵加青霉胺组大鼠接受肝豆证号：SCXK(苏)2008—0004。动物房为普通级饲养灵o．486g

7、／kg和青霉胺0．09g／kg(相当于成人临室，实验前先适应性饲养1周。床用量的6．3倍)灌胃，青霉胺组大鼠仅接受青霉胺1．2主要仪器切片机(LeicaRM2135)：德国；切0．09g／kg灌胃，空白组和模型组大鼠接受等容量片漂烘仪(科力飞QP—B)：安徽合肥电子研究所；石生理盐水灌胃。均每日1次，共6周。在第13周实验结束后，共死亡大鼠26只，剩余49只，各组动物蜡包埋机(亚光YB一7B)：湖北孝感；图像采集及图像分析系统：美国Bio—Rad生物仪器设备公司。禁食12h，在2戊巴比妥钠腹腔麻醉下，分别留取血清、肝组织标本。基金项目：国家自

8、然科学基金项目(81202692)；安徽高校省2．2指标检测采用TUNEL法检测细胞凋亡。级自然科学研究项目(KJ2012Z223)结果判定：胞质棕黄色的细胞为HS