脊髓星形胶质细胞fgfr3在神经病理性疼痛中的作用

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1、第三军医大学硕士学位论文脊髓星形胶质细胞FGFR3在神经病理性疼痛中的作用姓名：谢科宇申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：杨天德201205第三军医大学硕士学位论文脊髓星形胶质细胞FGFR3在神经病理性疼痛中的作用摘要研究背景与目的：神经病理性疼痛(neuropathicpain，NPP)是由于神经组织损伤或神经系统功能障碍而产生的慢性疼痛过程，其病理生理学机制极其复杂[1】。NPP的特点有：感觉异常(如非疼痛性刺激认为是疼痛性刺激)、痛觉过敏(正常痛觉刺激扩大)和白发性(与已知刺激不相关的电击、刺痛或烧伤样疼痛)等【2】。以往对于NPP的研究多围绕神经元、神

2、经细胞展开，但从上世纪90年代初期开始星形胶质胶质细胞的作用开始引起广大疼痛研究者的高度重视【3】，大量的动物实验以及细胞实验证明星形胶质细胞主要以炎症反应的方式参与了神经病理性疼痛的调节【3'41。星形胶质细胞在神经性疼痛的发生和发展中发挥了作用【5】。近年来研究发现，神经病理性疼痛模型中能观察到FGFR家族的活化，提示FGFR家族可能参与了神经病理性疼痛的形成【6】。成纤维细胞生长因子受体(fibroblastgrowthfactorreceptors，FGFRs)属于受体酪氨酸蛋白激酶(receptortyrosinekinase，RTK)家族，它们通过与成

3、纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor，FGFs)结合后发挥生物学功能【7】。FGFR3是FGFRs的一种，它在发育中的中枢神经系统中广泛表达[8】，研究表明FGFR3和中枢神经系统发育密切相关。FGFR3调控多种神经元的分化，在脊髓少突胶质细胞的前体细胞、脊髓的运动神经元中亦可观察到FGFR3的表达[9】。亦有研究发现FGFR3通过特异性结合其配体FGFs调节星形胶质细胞的分化、生长与增殖。因此，在理论上我们推测FGFR3有可能通过促进胶质细胞的活性，而参与神经病理性疼痛的形成。明确FGFR3在神经病理性疼痛中的作用机制，将有利于确定FG

4、FR3在神经病理性疼痛的作用，可能为神经病理性疼痛的治疗找到新的治疗靶点。主要方法和技术路线：1．取体重为180—200g的SD雄性大鼠20只，随机分为两组，分别制作坐骨神经分支选择性结扎神经病理性疼痛模型组(SNI)和假手术组(sham)，制作前1天测定两组大鼠右侧后爪机械痛阈值(Pawwithdrawlmechanicalthreshold，PWPT)，于术后1，3，5，7天分别测定两组大鼠患侧后肢PWPT，并在各时间点取大鼠脊髓L4一L6第三军医大学硕士学位论文段，免疫荧光双标检测GFAP术后各时间点的表达情况；Real—timePCR检测术后1，3，5，7

5、天两组大鼠FGFRl—4以及GFAPmRNA的表达水平。2．雄性SD大鼠40只，随机分为SNI组和sham组，分别于术前1天以及术后1，3，5，7天测定大鼠右侧后爪PWPT，采用免疫荧光双标技术观察两组大鼠术后7天脊髓背角星形胶质细胞的FGFR3和GFAP共表达情况，蛋白质印迹(Western—blot)法检测术后各时间点两组大鼠FGFR3蛋白相对表达情况。3．雄性SD大鼠随机分为3组，分别为：A组(对照组)：正常大鼠鞘内置管；B组：SNI+注射生理盐水组(20Ltl)，1次／天，连续14天；C组：SNI+鞘内注射FGFR3抑制剂PDl73074组(20}t1)，

6、1次／天，连续14天。测量术前1天以及术后1，5，7，14天三组大鼠患侧后肢PWPT，并取各组大鼠脊髓L4．L6段，免疫荧光观察术后7天A，B，C三组大鼠GFAP以及FGFR3阳性细胞表达情况。检测各组大鼠术后各时间点GFAP、TNF—O【、FGFR3mRNA表达水平变化。结果：1．SNI组大鼠PWPT与术前1天相比存在显著差异(P<0．05)，在各时间点较sham组明显降低(P

7、成员间mRNA变化存在差异：SNI、sham组大鼠FGFRlmRNA表达术后第1天最高，随后表达迅速下降。SNI组和sham组大鼠FGFR2，3，4mRNA在术后5天之内维持在低水平而SNI组大鼠在第7天显著升高，两组之间差异显著。2．术前1天两组大鼠PWPT无明显差异(P>O．05)，术后1、3、5、7天SNI组大鼠PWPT分别为6．67_+2．12、3．17_-,20．99、2．33_+0．65、1．75_+0．31，相应时间点sham组大鼠PWPT分别为12．75_+2．83、12．33_+2．84、12．08_+2．57、11．50±2．65。SNI组PW

8、PT在各时