黄芩苷对肺腺癌a549细胞增殖及凋亡影响的机制研究

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1、河北医科大学硕士学位论文黄芩苷对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡影响的机制研究姓名：郑海峰申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：段国辰201203中文摘要·黄芩苷对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡影响的机制研究摘要目的：肺腺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，在我国，肺腺癌死亡居恶性肿瘤首位。化学治疗在肺腺癌治疗中占有很重要的地位，虽然化学疗法方案等不断进行完善，但化学治疗存在一定的不良反应和多药耐药性。因此，寻找效果明确、不良反应少的药物对临床肺腺癌治疗的意义重大。黄芩苷(baicalin)是一种黄酮类化合物，是黄芩的主要有效成分

2、，具有抗氧化、诱导干细胞分化、神经保护、抗血管增殖等药理作用。也有研究表明，黄芩苷具有明显的抗肿瘤作用，能够抑制肝癌、粘液表皮样癌等肿瘤细胞的增殖，促进其凋亡，是当前抗肿瘤研究的热点。但关于黄芩苷与肺腺癌细胞的研究较少。本研究观察了黄芩苷体外对肺腺癌细胞株A549的作用，并从增殖和凋亡的角度，采用RT-PCR及Western．blot方法探讨了黄芩苷对A549细胞增殖相关因子PCNA、CyclinD、P21和凋亡相关因子Bel-2、Bax、Caspase．3表达的作用，为黄芩苷应用于肺腺癌的临床治疗提供一些新的理论依据

3、。方法：体外RPMI1640培养液常规培养人肺腺癌A549细胞，取对数生长期的肺腺癌A549细胞，加入0、0．625、1．25、2．5、5．0、10．0mg／L黄芩苷，分别孵育24、48、72h，MTT方法分别测定波长为490nm时的OD值，计算细胞生长抑制率，细胞生长抑制率％=(1．实验组OD值／对照组OD值)×100％，并进一步用SPSS统计软件计算细胞生长抑制50％的药物浓度(IC50)值及10％的药物抑制浓度(IClo)值；取对数生长期的肺腺癌A549细胞分二组：对照组(培养液)和黄芩苷组(1．22mg／L黄芩

4、苷)，孵育A549细胞24h后，收集细胞，提取RNA，RT．PCR方法测定细胞周期相关基因PCNA、CyclinD、P21mRNA的表达；提取细胞总蛋白，Western．blot方法检测细胞周期相关基因PCNA、CyclinD、P21蛋白的表达水平；FCM测定细胞凋亡率的影响；RT．PCR及Western．blot方法测定凋亡相关基因Bcl．2、Bax、Caspase．3的表达情况。结果：1黄芩苷抑制肺腺癌细胞A549细胞增殖’·中文摘要⋯。MTT方法显示0．625、1．25、2．5、5．0、10．0mg／L黄芩苷分别

5、孵育24、48、72h时对A549细胞增殖有抑制作用，随着作用时间的延长和剂量的增大抑制作用明显增强，由此表明，黄芩苷以剂量和时间依赖的方式抑制肺腺癌A549细胞的生长。SPSS统计软件计算所得IC50值分别为：7．38、5．04、3．94mg／L，IClo值分别为：1．22、0．71、O．65mg／L，确定细胞抑制率≤10％的浓度为非细胞毒性浓度，因此选黄芩苷浓度为1．22mg／L作用24h作为试验的安全剂量进行下一步的实验。2黄芩苷调节肺腺癌A549细胞周期相关因子的表达经1．22mg／L黄芩苷处理肺腺癌A549细

6、胞24h后，RT．PCR结果显示，与对照组相比，黄芩苷组周期抑制基因P21mRNA表达水平(O．27士0．06比0．47士0．07)显著升高(P<0．01)，周期促进基因PCNA表达水平(O．68+0．16比0．22土0．03)显著下降(P

7、D和P21表达抑制A549细胞增殖。3黄芩苷促进肺腺癌A549细胞凋亡经1．22mg／L黄芩苷处理肺腺癌A549细胞24h后，FCM结果显示，与对照组相比，黄芩苷组细胞凋亡率(3．1钍1．01比9．29士1．65)明显上升；RT．PCR结果显示，与对照组相比，黄芩苷组凋亡抑制基因Bcl．2mRNA表达水平(O．73+0．09比0．334-0．04)显著下降(P

8、士0．11)显著升高，Bcl．2／Bax比值(2．34+0．37比0．39士0．04)显著降低(P