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1、高效液相色谱法在鱼药残留测定中应用【摘要】为了防范和治疗疾病，在养殖过程中对鱼用药是不可避免的，但鱼体内的药物残留问题也受到大家的重视。人们建立了许多测定鱼药残留的方法，高效液相色谱法就是其中之一。本文结合具体试验，介绍了高效液相色谱法在鱼药残留测定中的应用。结果表明：该方法具有灵敏、准确、简便、快速等优点，适用于鱼药残留的检测。【关键词】药物残留；测定；磺胺类药物；高效液相色谱法近年来，我国水产养殖业发展迅速，其集约化的程度提高的很快，可是随着该产业的发展，水质渐趋恶化，疾病的预防与治疗问题变得颇为
2、紧迫，因此，越来越多地对于鱼进行用药，但鱼产品中的药物残留状况不乐观。为了让消费者用上放心的鱼产品，就必须加强鱼药残留的测定工作。目前,动物性食品中兽药残留量的测定主要有分光光度法、示波极谱法、毛细管电泳法、高效液相色谱法、气相色谱法和高效液相色谱-质谱法等。下面，就结合具体试验，介绍高效液相色谱法在鱼药残留测定中的应用。1.试验部分1.1仪器与试剂Waters2695高效液相色谱仪，配2487紫外检测器；ALLEGRATM21R髙速冷冻离心机；BuchiR-205Advance旋转式蒸发仪。❷喳酸、
3、磺胺11密喘、磺胺甲基11密噪、磺胺二甲基嚨唳、磺胺二甲氧11密唳、蔡唳酸、咲喃P坐酮标准储备溶液：分别称取各标准品O.OlOOg,用乙惰(1+1)溶液溶解后定容至1OOML,配成lOOmg•L-1标准储备溶液。用时用乙睛稀释配成所需浓度。乙惰、甲醇、乙酸均为色谱纯；其余试剂为分析纯；试验用水为超纯水。1.2色谱条件WatersSymmetryC18色谱柱(250MMX4.6mm,5um),柱温35°C,流量l・0mL•Min-l,检测波长265nM,进样量20pLo流动相A为乙睛，B为0.08mol
4、•L-1乙酸溶液，梯度洗脱程序：0〜lOmin,A由10%升至60%,保持lOMin；20〜20.05min,A由60%降至10%,保持9.95mino1.3试验方法1.3.1样品提取称取鱼肉试样5.000g于50mL离心管中，加入乙鷹20mL及经650°C烘干的无水硫酸钠10引涡旋振荡2min,以10000r•min-1转速离心10min,上清液转移至125mL分液漏斗中。残渣中加入乙M20mL,按上述方法再提取一次，上清液合并于分液漏斗中。1.3.2脱脂加正己烷30mL于分液漏斗中，加塞剧烈振荡5
5、min,充分静置分液，收集乙睛层（下层）于250mL旋转蒸发瓶中，加入正丙醇5inL,于4（TC水浴条件下减压旋转蒸发至干。1.3.3净化1）中性氧化铝柱净化：中性氧化铝柱使用前用乙騰-水（95+5）溶液10mL预洗并活化。测定磺胺类和咲喃口坐酮药物时，将第1.3.2节中的残渣用乙月青-水（95+5）溶液5mL溶解，旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱，收集稀释液至另一旋转蒸发瓶中，并于4（TC水浴条件下减压旋转蒸发至干。往旋转蒸发瓶中加入乙月青-水（4+6）溶液ImL溶解残渣，以lOOOOr•min-1转速离
6、心lOmin,上清液经0.45Um微孔滤膜过膜,滤液在色谱条件下进行分析。2）C18柱净化：测定❷喳酸和蔡噪酸药物时，取1.3.2节中的残渣用0.05mol•L-1磷酸二氢钠溶液5mL溶解，C18固相萃取柱先后用10mL甲醇和0.05mol•LT磷酸二氢钠溶液10mL预洗并活化。旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱，再用0.05mol•L-1磷酸二氢钠溶液10ML清洗C18柱，弃掉流出液。2.结果与讨论2.1色谱柱的选择磺胺类、喳诺酮类和咲喃陝酮的分离通常采用C18反相柱，试验对AgilentSBC18柱、Ag
7、ilentTCC18柱、SunfireC18柱和SymmetryC18柱的分离效果进行了考察。结果表明:除AgilentTCC18柱的分离过程中有小的杂质峰出现外，其它3种色谱柱均可实现基质和药物的较好分离；比较基线的水平性和色谱峰的响应值，SymmetryC18柱的分离效果较好，试验选择SymmetryC18柱为色谱分离柱。2.2流动相组成及洗脱程序的选择磺胺类药物含有氨基、苯磺酰胺结构，具有弱碱性；＜诺酮类药物是两性化合物；咲喃哇酮结构中也含有两性基团，因此调节流动相的pH值可抑制弱碱的离解，从而
8、改变色谱峰的保留时间。结果表明：酸度过高，磺胺类药物较难完全分离，且对色谱柱有所损伤；酸度过低，色谱峰会出现明显拖尾现象，试验选择0.08mol•L-1乙酸溶液控制流动相酸度。乙惰与乙酸溶液以不同体积比组成的混合溶液影响保留时间和峰形。由于蔡噪酸极性较小，C18色谱柱对其吸附较强，以乙M-0.08mol•L-1乙酸（15+85）混合溶液为流动相等度洗脱，蔡唳酸在73.3Min时出峰，大大延长分析时间,且由于药物在流动相中的扩散作用，峰形也较差。以乙睛-0
