大蒜病毒病原鉴定与其检测技术分析

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1、黑龙江八一农垦大学硕士学位论文第一章文献综述1．1植物病毒病的鉴定技术第一章文献综述植物在生长的过程中要受到各种病虫害的侵扰，特别是有癌症之称的植物病毒病害，它是农业生产上的主要病害之一．全世界每年因为病毒病导致的农作物损失达200亿美列”。—种病毒可侵染多种植物，而同种植物又可被多种病毒复合侵染，且病毒一旦侵入寄主植物即可导致细胞和组织结构发生变化而引起叶片黄化、褪绿，枯斑、坏死．皱缩，卷曲、植株矮化，果实减少或畸形。病毒可以通过各种途径传播，如昆虫(叶蝉、飞虱，蚜虫．螨类)．病毒汁液，土壤中的线虫．真菌，种子，花粉，苗木和菟丝子等捌。植物病毒种类多，繁殖快．传播途径广，难防

2、治，病毒一旦流行，即可对产量造J$掺重损失。我国每年由植物病毒造成的损失难以计数，有很多重要的病毒病害己遍及全国主要产区，如：20世纪70～舯年代我国北方地区因小麦丛矮病及土传花叶病流行—般减产20％～30％，严重的达60％，甚至绝产；南方水稻病毒病的流行—般减产20％～30％；近年来，黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和芜菁花叶病毒造成许多蔬菜品种减产或绝芦”；大蒜感染病毒病一般可减产20％,--,．45％131。目前病毒病的控制只能通过选育抗病品种，消灭传毒昆虫，采用合理的栽培措施，用无性繁殖法培育无毒苗，接种弱毒株来保护植物，植物检疫防治病毒病传播等方式。而植物病毒的诊断和病原的

3、鉴定是病毒病防治的基础，也是植物病毒分类学研究的—个重要环节。很多植物病毒学家和植物病毒学工作者曾经利用生物学、血清学、物理学、化学等多种技术对病毒病进行诊断和鉴定，19世纪30年代以前，植物病毒的鉴定与分类主要根据寄主范围、症状、体外抗性及介体传播方式等生物学性状：40年代后，理化特性及血清学技术开始广泛应用于植物病毒的鉴定与分类研究中；70年代后，分子生物学技术在植物病毒鉴定与分类中的应用日益广泛。近年来病毒的检测鉴定技术发展很快，特别是随着信息技术和生物技术的应用和发展，揭示了很多过去不被人们认识的病毒本质特性，使病毒的检测和鉴定方法越来越多，已形成较完整的体系H。1．1

4、．1生物学测定生物学测定方法是美国病毒学家霍姆斯口如h11田在1929年发现的，是植物病毒检测常用的一种方法。不同的病毒往往都有—套鉴别寄主或特定的指示植物，鉴别寄主是指接种某种病毒后能够在叶片等组织E产生典型症状的寄主，指示植物指接种某种病毒后能产生独特症状的—种寄主。根据试验寄主E表现出来的局部或系统症状，可以初步确定病毒的种类和归属，在一定范围内，枯斑数与侵染性病毒的浓度成正比，能测出病毒的相对侵染力，对于病毒的定性有着重要的意义11。例如，PVX接种千日红可形成局部坏死斑，因此千日红能从感染多种病毒的马铃薯植株上鉴别出PVX州。鉴定大蒜病毒的寄主主要是茄科、藜科、十字花

5、科和百合科等植物，它们对某种病毒有化学专—性反应，如：在蚕豆(随妇庙酬和千日红(G∞耐m∞鲥口址叫等寄主植物上可分离出大蒜潜隐病毒(GLV)和大；虢叶病毒(GMV)川；利用苋色裁a"呼叫hⅢ∞∞硎缸枥巾凇测到大蒜E的青葱潜隐病毒(SLV-G)；通过人工接种鉴定，在墙生藜(CbⅢ日p口也"m％*口∞和昆诺藜(cbm卿彘mqualoa)上可分g啦测到大蒜黑龙江八一农垦大学硕士学位论文第一章文献综述上的洋葱螨传潜隐病毒(OmbLV-G)和大蒜普通潜隐病毒(GaⅣ)病斑。但是，生物学测定也有很多不足之处，如：工作量大、检测时间长、灵敏度差，且病毒症状反应常受环境、土壤和气候条件的影响1

6、a42]：有些病毒的寄主范围很窄，找不到合适的鉴别寄主；不同病毒在同种植物上常产生相同症状，同种病毒在植物的不同栽培品种上的症状也不尽一致；复合侵染及病毒卫星RNA会影响症状表现：还有一些病毒常会产生潜隐侵染现象，这些都在一定程度t制约了这种方法的应用。但此方法依旧是病毒鉴定方法的—个重要基础，尤其在病毒株系鉴定方面L“。对某—病毒分离物进行血清学或分子生物学研究之前，摄好进行生物学鉴定，以使结果更为可靠114J。1．1．2电子显微镜技术电镜技术在近70年的发展历程中，已广泛应用于生物学、组织学、细胞学、病毒学等各个领域，电子显微镜技术可以说是某些病毒最直接、最准确的检测手段。

7、自从Kausche等首次在电镜下看到TMV以来，电镜已成为植物病毒研究必不可少的常规手段之一。植物病毒电镜诊断最常用的方法是负染色和超薄切片技术，而结合免疫电镜技术则可以更进—步判断血清学关系、研究病毒在细胞内的复制和装配等。Ll工l电镜负染检测法圆Iec血ⅧNegetqveStain)电镜负染技术的原理是—些重金属离子能绕核蛋白体四周沉淀下来，形成—个黑暗的背景，而在核蛋白体内部不会沉积形成一个清晰的亮区，其图像如同一张照相的底片，因此人们习惯地称为负染刨15-16]。一般将病毒纯化样品或