具杀线虫活性植物内生细菌和根际放线菌的筛选与防效分析

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1、2．3最佳培养基碳源的筛选⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。482j4正交优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯493、小结与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5l第六章具杀线虫活性植物内生细菌和放线菌的防效实验．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯531．1供试材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯531．1．1菌株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。531．1．2培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯531．1．3实验仪器和试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54。1．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．541．2．1培育番茄苗⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．541．2．2放线菌对番茄根结线虫的防效实验⋯⋯⋯⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．541．2．3植物内生细菌对番茄根结线虫的防效实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．541．2．4放线菌和内生细菌对番茄根结线虫的复合防效实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．552结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55Z1放线菌对番茄根结线虫的防效⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．552．2植物内生细菌对番茄根结线虫的防效⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。552．3放线菌和植物内生细菌复配对番茄根结线虫的防效⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．563小结与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57全文小结参考文献在读期间发表的学术论文与研究成果⋯⋯⋯．致谢附图⋯⋯⋯⋯⋯。⋯．．59616970．．．⋯⋯．71摘要植物寄生线虫是危害植物的重要病原物，为了筛选到对植物寄生线虫具有较高杀线虫活性的植物内生细菌和植物根际放线菌。本研究进行了内生细菌杀线虫活性菌株的分离、筛选和鉴定，并对其中活性最强的菌株进行了发酵条件的优

4、化；研究了内生细菌和根际放线菌发酵产物杀线虫物质的稳定性；还研究了内生细菌和放线菌对根结线虫的防治效果，以及内生细菌和放线菌复配对根结线虫的防治效果；结果如下：一1、采用组织分离法从6种植物中分离筛选出112株内生细菌，用黄瓜无菌苗定殖量测定法筛选得到64株能稳定定殖的菌株。以松材线虫为靶标，用直接触杀法进行筛选，从这64株能稳定定殖的菌株中筛选得到13株对松材线虫具有较高杀线虫活性的植物内生细菌，这些菌株的发酵上清液对松材线虫处理24h杀线虫率均达到了100％；其中BCM2、SZ5、CCM7和DPI这4个菌株的杀线虫活性较高，发酵上清液稀释3倍处理24h杀线虫率均达到95％以

5、上，DPI和SZ5菌株达到了100％；并发现部分菌株发酵液能使线虫虫体发生渗漏或消解。2、同时本文还对土壤中分离得到的326株放线菌进行了杀线虫活性的筛选，得到了2l株具有杀线虫活性的放线菌，这2l株放线菌的发酵上清液对松材线虫的24h处理死亡率均达到了80％以上，其中有8株放线茵发酵液的杀线虫活性达到了100％，而且部分菌株也能产生使线虫消解的物质。经过对其中16株活性较高的放线菌进行复筛，得到了五株活性较好的放线菌，分别为：NKl7、NKl9、凇7、№9和V21。3、采用生理生化鉴定和16SrDNA序列测定方法鉴定了4株高活性植物内生细菌的归属种类，结果鉴定DPI和CCM7

6、为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，BCM2和SZ5是蜡样芽孢杆菌(BacillUScereus)。．’4、经过杀线虫代谢物质的理化性质的研究和发酵液中杀线虫活性物质的稳定性测定，证明5株放线菌产生的杀线虫物质均是一种可以挥发的小分子碱性物质；4株植物内生细菌产生的物质是一种对蛋白酶稳定、耐热不耐酸碱且长时间保藏活性不下降的小分子肽类物质。5、采用单因素法测定4株植物内生细菌发酵产生杀线虫物质的最佳碳氮源，并对这4株高活性植物内生细菌菌株采用正交实验法优化发酵条件，结果表明这4株植物内生细菌产生杀线虫物质的最佳碳源是蛋白胨，最佳氮源是牛肉膏，正交优化后使发酵液杀

7、线虫效果提高了4倍。．6、用盆栽苗灌根法研究了活性放线菌和植物内生细菌对根结线虫的防治效果以及放线菌和内生细菌的复合防效。放线菌对番茄根结线虫的防效结果较好的是NK29和NKl7，分别为38．17％和37．63％；而供试的7株植物内生细菌中除DPI外的6株植物内生细菌对番茄根结线虫均有一定的防治效果，其中BCM2和DP24对番茄根结线虫的防治效果较好，分别为57．35％和50％，其次为CCM7和DLJl。将BCM2和CCY7分别进行对番茄根结线虫的治疗实验和防治实验，结果表明这两株内生细菌对