jazf1基因抑制对糖脂代谢及相关信号通路的影响

《jazf1基因抑制对糖脂代谢及相关信号通路的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文JAZF1基因抑制对糖脂代谢及相关信号通路的影响姓名：杜林申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：李伶201205重庆医科大学硕士研究生学位论文JAZFl基因抑制对糖脂代谢及相关信号通路的影响摘要第一部分构建及筛选鉴定小鼠JAZFl．shRNA真核表达载体．目的：构建小鼠JAZFl．shRNA表达载体并构建JAZFl基因下调细胞模型，为下一步研究JAZFl抑制条件下的糖脂代谢提供实验基础。方法：针对小鼠JAZF．,1基因序列设计合成3条shRNA序列，载体为pGenesil．1．2，启动子选择为mU6，构建pGenegil-JA

2、ZFl抑制质粒1，2，3。转染小鼠Hepal．6细胞，运用荧光定量PCR技术筛选最佳抑制质粒，随后转染小鼠3T3．11细胞，对抑制效率进行验证。结果：成功构建了3条pGenesil．JAZFl重组质粒，其中pGenesil．JAZFl．3号抑制质粒筛选为最佳抑制片段。成功构建JAZFl基因表达下调细胞膜型，在hepal．6细胞中抑制率为78—84％；在转染诱导分化成熟的3T3．L⋯。肪细胞，其表达显著低于空白对照约57．3％。结论：成功构建JAZFl一shRNA表达载体，筛选出抑制效果最佳的质粒，并构建JAZFl基因下调细胞模型。关键词：JAZFl；shRNA

3、；pGenesil；Hepal一6：3T3一L1重庆医科大学硕士研究生学位论文第二部分JAZFl基因抑制对脂肪细胞和肝细胞糖脂代谢的影响目的：在JAZFl基因表达下调的细胞模型基础上，探讨JAZFl基因抑制对脂肪细胞及肝细胞糖脂代谢的影响。方法：小鼠脂肪细胞及肝细胞分别转染最佳抑制效率的pGenesil—JAZFl．3号质粒，应用免疫荧光法检测细胞糖代谢相关蛋白的表达，Westernblot法及细胞免疫荧光法检测两种细胞糖脂代谢相关蛋白表达的影响。细胞糖代谢指标的mRNA水平变化采用实时荧光PCR技术检测，脂肪细胞甘油三酯含量变化用油红O染色半定量检测，运用氢

4、三放射示踪法检测脂肪细胞糖摄取率。结果：在肝细胞中，糖代谢相关基因GLUTl和GLUT4mRNA表达下降(尸<0．05)，GLUTl蛋白表达升高但无统计学差异，G．6．Pase蛋白表达降低但无统计学差异，PEPCK蛋白表达水平降低(P

5、脂联素蛋白表达均下降(尸

6、条件下的AKT和AMPK的磷酸化差异不明显，无统计学意义。在脂肪细胞中，AKT／PKA／HSL脂代谢通路和AMPK／TORC2糖代谢通路均被抑制，有显著的统计学差异(P<0．01)。结论：JAZFl基因抑制是糖尿病糖脂代谢中信号通路的重要影响因素，其作用加重了糖尿病的风险。JAZFl、基因可能是促进糖脂代谢信号通路发生磷酸化的重要因子。关键词：JAZFl；AKT；AMPK；信号通路THEEFFECTSOFJAZFIGENEINHIBITSINAKTANDAMPKSIGNALINGPATHWAYONGLUCOSEANDLIPIDMETABOLISMABSTRAC

7、TPARTONECONSTRUCTIONOFJAZFlshRNARECOMBINANTPLASMIDINMICEObjective：ToestablishthemiceJAZF1．shRNAexpressionvectorandconstructthecellmodelofJAZF1geneinhibition．Methods：JAZF1shRNAsequenceweredesignedandsynthesizedSelectpGenesil-1．2carrierandin、U6promotertobuildpGenesil．JAZF11,2，3inhibit

8、theplasmid．Transfec