wrky转录因子sidrw1和nac转录因子sisrn1在番茄抗性反应中的功能研究

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1、分类号：坠三2：!密级：玉单位代码：!Q三三5学号：!Q墨!墨Q5墨洳≥：j▲嗜博士学位论文⑧WRKY转录因子SIDRWl和NAC转录因子SISRNl在番茄抗性反应中的功能研究提交日期2Q!垄生!且中国·杭州单位代码：研究生学号：10816058WRKY转录因子SIDRWl和NAC转录因子SISRNl在番茄抗性反应中的功能研究论文答辩日期2012．3．10答辩委员会主席周雪垩数援一(姓名、职称、单位)论文评阅人巫囱隆名迁阅一(姓名、职称、单位)㈣卯燃一FunctionalanalysisoftomatoWRKYtranscri

2、ptionfactorSIDRWlandNACtranscriptionfactorSISRNlintheregulationofdefenseresponsebyLiuBoAdissertationsubmittedinpartialfulfillmentoftherequirementsforthedegreeofDoctorofPhilosophy1nPlantPathologyatZHEJIANGUNIVERSITYSupervisor：Prof．SongFengmin。gHangzhou，Zhejiang310058

3、People’SRepublicofChinaJanuary,2012III浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中j再包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解迸婆盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论

4、文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日致谢时光荏苒!转眼学生生涯行将结束!回首博士生活，感慨颇多。这是个收获的季节，学习了知识，收获了技能，增长了对生活的理解。有喜就有忧，实验中难免会遇到挫折和疑惑，生活中难免会有迷茫和摩擦。幸好身边有老师的指点，还有亲朋好友的理解、支持和鼓励。才能使我在消沉时及时重

5、拾信心，才能使我的实验得以顺利的完成，才能使我的最后几年学生生涯增添许多美好的回忆。值此论文完成之际，向所有关心和帮助过我的人们表示由衷的感谢!首先，我要感谢恩师宋凤鸣教授。本论文是在导师的指导和关怀下完成的，从选题立意、实验方案到研究结果分析整理、论文修改以至最终定稿，都凝聚着导师无数的心血和智慧。特别是他对科研的热爱，对工作的严谨，以及他乐观的生活态度，都将对我以后的人生路产生莫大的影响。其次，感谢实验室所有成员在科研上给我的指导和帮助，同时感谢他们在生活中的陪伴以及给予我的帮助、信任和包容。最后，特别感谢我的父母、妹妹以

6、及所有其他亲朋。是他们的爱和理解，让我在曲折的前进道路上无后顾之忧，乐观前行!V刘波2012-1-9于紫金港摘要转录因子作为复杂的信号网络中的成员，在调节植物应对来自周围环境因子胁迫的过程中发挥着重要的作用。其中，WRKY,NAC等转录因子家族成员在植物生长发育和抗逆等过程中发挥着重要的调节功能。而目前关于这两个转录因子家族的研究主要集中在水稻和拟南芥中，番茄等其他植物中的研究很少。本文从番茄中克隆了12个NAC和6个WRKY转录因子基因，并且主要利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)等技术鉴定了它们在番茄抵抗病原菌以及非生物胁迫

7、过程中的作用，初步筛选出2个具有重要调节功能的基因SIDRWl(defense．relatedWRKY1)和SISRNl(stress．relatedNAC1)。实验结果表明，WRKY转录因子S1DRWl在番茄与灰霉互作过程中是一个正调控因子。分析发现，WRKY转录因子基因SIDRWl编码一个由360个氨基酸组成的蛋白，根据推测其分子量大约为39．7kDa，等电点为8．13。而且，它在序列上与另外两个番茄WRKY转录因子基因SIWRKYl和SlWRKY2分别具有99％和91％的相似度。进一步对SIDRWl和SIWRKYl的OR

8、F氨基酸序列比对分析发现，这两个基因为同一基因。通过实验手段验证了S1DRWl的转录激活活性，结果表明，它可能是一个转录抑制子。GFP融合蛋白分析显示，该基因定位于细胞核内。接种灰霉病菌后，SIDRWl在番茄叶片内的表达在接种后24h(24hpi)突然升高，48hpi达到高峰