β-catenin对大鼠髋脱位关节软骨细胞增殖和凋亡影响的实验研究

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1、万方数据复旦大学同等学力硕士学位论文B-catenin对大鼠髋脱位关节软骨细胞增殖和凋亡影响的实验研究ExperimentalresearchofeffectsofI]-cateninontheproliferationandapoptosisofchondrocytesduringtheearlydegenerationofdislocationalhipofrat硕士研究生：王彭导师：马瑞雪教授2013年4月万方数据中文摘要一⋯英文摘要⋯一英语缩略词索弓l一一一一一目U舌目录15材料与方法一一一⋯一一一一1．实验动物分组及标本

2、采集⋯一2．实验试剂及仪器一3．实验步骤与方法一4．统计分析一一一1．大体形态学观察一一⋯一一⋯一一2．组织形态学观察与Mankin评分一⋯一3．增殖指数—与凋亡率一一⋯一一一一13一一13————14192023254．LiCl干预后软骨细胞增殖与凋亡的变化一一一一一30结{仓⋯一一一一一一一一一一一一一参考文献一一⋯一附录g紊烫蓬一一一一一一一一一一研究生期间完成论文⋯一一一一一一一致诩十一一一⋯一一一一一一一一一一一434449——————————53——————————54万方数据复旦盔堂回笠堂由亟±堂焦迨塞§：!型塑垫过

3、太鼠堂避鱼苤堇达鱼：鱼堕塑堕独迥圭墅堕盐塞堕堡究13-catenin对大鼠髋脱位关节软骨细胞增殖和凋亡影响的实验研究[背景和目的]中文摘要IIIIIIIIIIIIIlUlY2705761发育性髋关节脱位(Developmentaldislocationofthehip，DDH)是d,JL矫形外科最常见的疾病之一，由于早期筛查工作的开展，大部分患儿能获得及时的治疗，但仍有部分患儿在治疗过程中出现再脱位、残余髋发育不良(ResidualacetabularDysplasiaRAD)，以致成年后早期出现退行性骨关节炎(Osteoarth

4、ritisOA)，最终进行全髋关节置换(Totalhiparthroplasty，THA)，降低了他们的生活质量。骨关节炎的实质是关节软骨发生退变，一般主要包括两方面，一方面细胞外基质的合成和降解代谢失衡；另‘方面软骨细胞的增殖和凋亡发生变化。目前对于DDH早期发生关节软骨退行性变的细胞和分子机制仍不清楚。近来有研究表明Ij-catenin介导的Wnt通路在关节软骨的发育、增殖、分化、凋亡以及维持内环境的稳定等方面起着关键作用。本课题组在前期实验研究发现13-catenin对关节软骨起着双向调节的作用，主要表现对于正常软骨在早期关

5、节发育阶段，[3-catenin主要是激活促进关节软骨分化成熟，软骨发育成熟后13．catenin表达迅速降低；但在髋脱位关节软骨中随着发育成熟[3-catenin的表达继续升高，促进了关节软骨发生退行性改变，推测关节软骨发生退变可能与13-catenin激活后导致x型胶原(ColX)以及基质金属蛋白酶(MatrixmetalloproteinaseMMPs)的表达上调有关。正常情况下，软骨细胞是软骨组织内唯一的细胞类型，它在软骨基质损伤及重塑过程中对维持内环境的稳定起着重要作用，但在关节软骨退变过程中13-catenin对软骨细

6、胞的增殖、凋亡的调控尚未见相关报道。因此，本文拟通过动物实验来模拟髋脱位的自然进程，探讨关节软骨在退变过程中13-catenin对软骨细胞增殖和凋亡的调控作用，为进一步深入研究DDH发生退变的分子机制提供新思路。[方法]1．60只新生Wistar大鼠随机分成实验组(n=30)和对照组(n=30)，雌雄不限，体重均等。并按鼠龄分为2周龄组(n=10)、4周龄组(n=10)、8周龄组(n=10)，对照组按照类似方法进行分组。实验组大鼠模拟襁褓体位采用医用胶带对双髋双膝伸直并拢固定10天制作髋脱位动物模型，然后去除外固定后继续饲养。每组

7、达到预期时间进行取材进行实验。其中一侧髋关节经过固定、脱钙从冠状面万方数据复旦杰堂圃笠堂尘亟±堂焦监塞§：!堕!堕垫盟友鼠篮避焦差堇筮：匿绁塑擅堕塑塑圭墅堕盟塞验婴塑剖开拍照存档用于测量臼深指数以及股骨头形态指数，然后制成切片进行番红0一固绿染色和p-catenin免疫组化染色，高倍镜下随机取五个不同视野观察组织形态变化以及[3-catenin在不同时段关节软骨中的表达，并进行Mankin评分评估软骨退变程度。2．另一侧髋关节用于提取关节软骨细胞进行原代培养，II型胶原免疫荧光及甲苯胺蓝染色鉴定，采用CCK一8、流式分析细胞周期，

8、检测两组在不同时段的增殖能力与凋亡情况；3．对8周龄对照组贴壁软骨细胞进行LiCl干预，激活13-catenin表达，免疫荧光检测p-catenin；重复CCK一8、流式细胞分析检测软骨细胞的增殖能力、细胞周期以及凋亡的改变；TUNEL免疫荧光法检