含有hygromycin抗性的hbv稳定表达细胞系构建及鉴定

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1、重庆医科大学硕士学位论文含有Hygromycin抗性的HBV稳定表达细胞系构建及鉴定姓名：王李英申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：汤华201205重庆医科大学硕士研寇生学位论文含有Hygromycin抗性的耶V稳定表达细胞系的构建及鉴定摘要目的：构建含有Hy删ciIl抗性的稳定表达HBV的细胞研究模型。方法：构建pSEH-F1ag．HBV重组质粒，经酶切和测序鉴定，脂质体2000转染HepG2细胞，Hy删Cin筛选，ELISA检测细胞上清液HBsAg、HBeAg的表达情况，选择HBsAg、船eAg表达量均高的细胞株进行下一步的检测，PCR、

2、Sou也emblot血g检测细胞内HBVDNA，RT．PCR检测细胞HBx、Hy孕。玎哆cin基因mRNA的表达，W．estemblo尬g检测细胞C蛋白的表达。结果：成功构建HBV全基因克隆质粒pSEH-flag-皿V，转染H印G2细胞后，培养液上清HBsAg，HBeAg阳性，Wbstemblot曲g检测船c在蛋白水平有表达，RT-PCR检测到HBx、Hygromycin在mRNA水平有表达，Soumembl砷血g验证了H印G2细胞基因组中有腿V片段的单一整合。结论：重组质粒pSEH-flag-HBV能在H印G2细胞中稳定复制、转录和表达。重庆医科大学硕

3、士研兔生学位论文关键词：船V；Hy铲omycin；稳定细胞系；H印G2细胞4重庆医科大学硕士研究生学位论文STABLEEXPRESSIONANDINTEGRATEDHEPATITISBVIRUSGENoMEINAHUⅣ【ANHEPATOⅣIACELLLINEABSTRACTobjec伽e：Tocons仃uCtaceUlinec衄向血gresistallcetoHygr01nyciIl趾ds讪lyeXpressinghep撕tisBea砸gen(HBeAg)andh印撕廿sBsurfaceaIldgen(HBsAg)．Methods：Theplas血dpS

4、EH-Flag—HBVwasidenti丘edbydoIllblediges缸onandsequencing，a11dmeh印atomacelllineHepG2cellswere咖sfectedwim皿splasmidbyliposome，aIldthensCreenedwimHy粤．omycin．ELISA．PCR，I誓r-PCR，W-est锄blo蛐gandSo删血emblottingwereusedtodeteCtmeexpressionofHBVinmiscenliIle．Results：Thesizeof血erecombinantplasnl

5、idpSEH．Flag．HBVwereexpressedandinte伊atedinHep(讫，w11ichd锄ons仃atedbyELISA，PCRRT-PCRWestembl蛐gandSoumembl砌ng．Condusion：OnestableceUlineH印G2-H4matHBVgenomewasinte眺dsing坶inthiscellularDNAissuccess如11yestablished．Keywords：HepatitisBVnus；StableceUline；H印G2ceⅡ；Hygromycin．5重庆医科大学硕士研究生学位论文

6、英文简写PCRbpDNAHCCHBVBSA。，kKbED’I’ARN蹈eRTDMSODNauseEBddH20mgODLBLADEPCgMngdNTPml英汉缩略语名词对照英文全称polymerasecllainreactionbaSepairdeo)哆ribonucleicacidHepatocellularcarcinomah印atitisBvirusbovinesemmalbuminkilobasee_tIlylenedi锄iIletet嗽c甜cacidribonucleasereVerse仃anscrlptlondimethylsulfoxide

7、deoxyribonucle舔eetllidiumbromidedouble．distilledwatermilli舒锄opticalderlsi锣luria．bertaIlimediumLB+anlpicilinedietIlylpyrocarbonategraV蚵Mol／升nanogramdeoxyribonucleoside仃iphosphatemilljliter中文全称聚合酶链反应碱基对脱氧核糖核苷酸肝细胞癌乙肝病毒牛血清白蛋白干碱基乙二胺四乙酸砌怆酶逆转录二甲基亚枫DNA酶溴化乙锭双蒸水毫克光密度LB培养基加氨苄青霉素的LB培养基焦炭酸二乙酯

8、重力加速度摩尔／升纳克脱氧核糖核苷三磷酸毫升重庆医科大学硕士研究生学位论文mMH