大豆肽的制备及其对小鼠免疫功能的影响

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1、广东海洋大学硕士学位论文大豆肽的制备及其对小鼠免疫功能的影响姓名：李红胜申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：徐春厚201206大豆肽的制备及其对小鼠免疫功能的影响摘要本研究旨在通过自然环境中筛选出适合豆粕液体发酵的菌株，通过响应面分析法优化大豆肽液体发酵工艺，提高蛋白质水解度，增加发酵液中低分子多肽的含量，开拓一条低成本大豆肽生产工艺路线。从湛江自然环境、生长的植物和动物肠道内容物中采集样品98份，用平板透明圈法进行初筛，从中分离出117株产蛋白酶的芽孢杆菌，其中有11株的透明圈与菌落直径比值(H／C)大于5．0；用Folin酚法测定11株芽孢杆菌发酵液的

2、蛋白酶活力，筛选出菌株y-6产蛋白酶的能力最强，48h发酵液中的蛋白酶活力达2852IU／mL；通过形态染色特性观察、生理生化试验和16SrDNA基因序列分析，鉴定菌株Y．6为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，暂命名为解淀粉芽孢杆菌Y．6(Bacillusamyloliquefaciensstrainy-6)。将解淀粉芽孢杆菌Y．6按4％接种GYP培养基，32℃、180r／rain振荡发酵6h、12h、18h、24h、30h、36h、42h和48h，4000r／min离心20rnin，取上清液，既为待测粗酶液；对粗酶液进行蛋白酶、淀粉酶

3、、纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶酶等酶活力测定；结果表明：48h的发酵液中蛋白酶活力为1072．3IU／mL，淀粉酶活力为3．75IU／mL，纤维素酶活力为8．35IU／mL，甘露聚糖酶活力为565．9IU／mL，无明显的果胶酶活性。对发酵液中蛋白酶的酶学性质进行了研究，结果显示该蛋白酶为中性蛋白酶，在pH7--7．5有最高的酶活力，最适作用温度为55℃，40℃以下有较好的温度稳定性；该酶不耐受酸性环境，pH5以下易失活，pH3环境下保存1h检测不出酶活力；Ca2+、Zn2+及吐温80对该酶有一定的激活作用，Mn2+、Fe3+、Cu2+及EDTA对酶有一定的抑制作用。采用Mi

4、nitab15．1版软件安排试验设计及试验结果统计分析，对解淀粉芽孢杆菌Y．6发酵低温豆粕制备大豆肽的工艺进行了研究；采用Plaekett．Burman试验设计对pH值、接种量、摇床转速、温度、装液量共5个因素的主效应及交互作用进行考察，确定了接种量、温度、摇床转速三个重要影响因素；利用Box．Behnken中心组合设计出15个试验的响应面分析试验，对接种量、温度、摇床转速三个因素做进一步的参数选择优化；优化后的参数为：接种量6．3％，发酵温度为39．89℃，摇床转速为187r／rain，优化参数后所得试验结果与回归模型预测吻合较好，说明所建立的回归模型是可靠的，可以较准

5、确地预测出大豆肽转化率；优化发酵参数后，大豆肽的转化率由最初的63．7％提高到78．15％。将120只小鼠随机分成三批，每批四组，每组10只；对照组饲喂基础日粮，三个试验组分别在基础日粮中添加l％、2％、4％的自制大豆肽，饲喂小鼠21d后，测定免疫器官指数、血清溶菌酶、巨噬细胞吞噬功能和血清溶血素；结果表明：大豆肽可以显著提高小鼠免疫器官指数，增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性，激发小鼠抗鸡红细胞抗体的产生，而血清溶菌酶活性则无明显差异。用高产蛋白酶的芽孢杆菌发酵低温豆粕制备大豆肽是完全可行的，所获得的大豆肽含量高，对小鼠免疫功能有增强作用。关键词：大豆肽，蛋白酶，液体发酵，

6、免疫功能，小鼠ⅡPreparationofSoybeanPeptideandItsEffectsofImmuneFunctiononMiceAbstractThepurposeofthisstudywastocarveoutalowcostproductionrouteofsoybeanpeptide，throughscreeningstrainsfromthenaturalenvironmentthatsuitablefortheliquidfermentationofsoybeanmeal，andthefermentationtechnologyofsoybeanpe

7、ptideWasoptimizedtoimprovethedegreeofproteinhydrolysisandincreasethelowmolecularpeptideofthefermentedliquid．98sampleswerecollectedfromthenaturalenvironment，growingplantsandanimalintestinaltractofZhanjiang．117Bacillusstrainsthatproducedproteinasewereisolatedfromthesa