菌素抑制tnf-α刺激arpe-19细胞分泌炎症因子的作用及机制研究

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1、重庆医科大学博士学位论文菌素抑制TNF--α刺激ARPE--19细胞分泌炎症因子的作用及机制研究姓名：王茜申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：杨培增201205黄连素抑制TNF．仅刺激ARPE．19细胞产生炎症因子的作用及机制研究摘要目的：黄连素(BBR)是在中国传统医药中广泛应用广谱抗菌药物。临床上主要用于治疗肠道细菌感染性疾病。它是否能影响人视网膜色素上皮细胞产生炎症因子的尚不可知。因此，研究黄连素对ARPE一19细胞产生炎症因子的影响作用及机制是本实验的目的。方法：在不同时间点，用黄连素处理与TNF—O【共培养的ARPE一19细胞。酶联免疫吸附实验(ELISA)检查细胞养上清中

2、IL．6、IL一8和MCP一1的蛋白浓度。实时定量PCR(real—timePCR)检测三种因子的mRNA水平。Western—Blot分析细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶、胞外信号调节激酶(ERKl／2)和c—JunN一端激酶(JNK)的磷酸化水平。使用p38、ERKl／2和JNK特异性抑制剂探讨三种因子的产生可能涉及的信号转导通路。结果：TNF—C【能显著的促进ARPE．19细胞从蛋白水平以及mRNA水平产生IL一6、IL．8和MCP一1。也能提高p38、ERKl／2和JNK的磷酸化水平。而抑制剂实验表明IL一6的产生主要是通过p38路径调节，而IL．8和MCP．1的产生与p38、ER

3、Kl／2以及JNK三条路径都有关系。黄连素则从蛋白和mRNA水平都能显著抑制由TNF一0t刺激产生的IL．6、重庆医科大学博士可院生学位沦文IL一8和MCP一1，并且下调p38、ERKl／2和JNK的磷酸化水平。结论：黄连素能显著抑制ARPE一19细胞表达炎症因子，并且该抑制作用是通过下调p38、ERKl／2和JNK信号通路来完成实现的。通路关键词：黄连素；视网膜色素上皮细胞淡症；细胞因子；MAPK信号4EffectofBerberineonpro-inflammatorycytokineproductionbyARPE一19cellsfollowingstimulationwithTN

4、F—uABSTRACTPurpose：Berberine(BBR)isawellknowndrugusedintraditionalmedicineandhasbeenshowntopossessanti-inflammatoryproperties．WhetheritCanaffecttheproductionofinflammatorycytokinesbyretinalpigmentepithelial(RPE)cellsisnotyetclearandwasthereforethesubjectofourstudy．Methods：ARPE一19cellswerecultured

5、withTNF一0tinthepresenceorabsenceofBBRfordifferenttimepoints．ConcentrationsofIL-6，IL一8andMCP—·1inthesupematantweremeasuredusinganenzyme··linkedimmunesorbentassay(ELISA)．mRNAexpressionofthesecytokineswasmeasuredbyreal—timepolymerasechainreaction(real-timePCR)Phosphorylationofp38mitogen—activatedpro

6、teinkinase(MAPK)，extracellularsignal—regulatedkinase(ERKI／2)andc-JunN-terminalkinases．(JYK)wasmeasuredbywestem·blot．Thesignaltransductionmechanismsinvolvedincytokineproductionwereevaluatedusingvariousinhibitorsrespectivelyforp38，ERKll2andJNKResults：TNF一0【significantlyincreasedtheexpressionofIL一6、

7、IL-8andMCP．．1inARPE．．19cellsatboththeproteinmRNAlevels．Itpromotedthephosporylationofp38，ERK1／2JNK．InhibitoryexperimentsshowedthatIL-6wasmodulatedbyp38whereasIL一8MCP一1weremodulatedbyp38，ERK1／2JNKsignalpathways．BBRremark