阿霉素和氯喹共载脂质体的制备及抗肿瘤作用

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1、⑧论文作者签名：—蝉指导教师签名：—哞牝万方数据论文评阅人1：塑直到二二浙江生医药太堂评阅人2：周慧蕉二二浙堑太堂评阅人3：割蕉耋二二泣逛太堂答辩委员会主席：睦国益二=浙塑鲞医叠暄委员1：芸丞江二二浙江太堂委员2：金二二二浙江太堂万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝望盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志

2、对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：辫屿飘y么字日期：沙／湃弓月冶日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝婆盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权盘鎏盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：瑚b狐旷导师签名：万P≯)为L签字日期：沙解弓月乙驷签字日期：2。f己年3月．≥箩

3、日万方数据浙江大学硕士学位论文致谢致谢本课题在选题以及研究过程中得到邱利焱老师的悉心指导，两年多来，邱老师为我指点迷津，拓宽研究思路，精心点拨和热忱鼓励。感谢邱老师对我学>--j上和科研上的督促，对我生活上的关心和照顾，能够让我顺利毕业。邱老师一丝不苟的治学作风和严谨的科研态度，将使我终身受益。感谢实验室的金一老师和刘龙孝老师，带给我一个共同学习的环境。感谢赵庆贺老师对我的关照，并且在实验之余能带领我们一起运动，感谢毕业的师兄师姐，尤其是王蓉娟师姐和郑程师兄对我实验室上的指导和帮助，感谢实验室的李博，鄢

4、璐，谢萌，徐晶，沈海俊，沈松，张璐，于洋，朱金芳，朱秀梅，陈碉，吕辛怡，鲁佳飞，李贞，高梦华，张晓丽，孔芬芬，王成润，金秧敏，郑毅，在这将近三年的时间里，科研上不了你们的帮助和支持，也因为有你们，我的生活才丰富多彩。也非常感谢实验中心的应晓英老师是我的实验能够顺利进行，以及医学院血液科的同学对我实验的无私帮助。万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要阿霉素和氯喹共载脂质体的制备及抗肿瘤作用浙江大学药学院硕士研究生导师药剂学姚铭飞邱利焱教授摘要阿霉素是一种临床上常用的抗肿瘤化疗药。但是阿霉素反复多次使用，容易

5、使肿瘤产生多药耐药性(Multidrugresistance，MDR)，这是导致肿瘤治疗失败的主要原因之一。已证实多种与肿瘤产生多药耐药性相关的机制，其中含有ATP结合框架的膜通道蛋白(ATP—bindingcassettetransporter,ABC)是一种被广泛认可和研究的机制。而P糖蛋白(P．gP)和多药耐药蛋白MRPl介导的MDR及其逆转是ABC家族中目前研究最为广泛和深入的课题之一。针对这一问题，本课题设计了一种阿霉素和氯喹的共载的脂质体，由于两个药物都是碱性两亲性化合物，而且Pa相近，因此

6、可采用pH梯度法实现两种药物在脂质体中的共同装载。本论文首先建立了DOX和CQ含量的HPLC测定方法，并对其线性范围、精密度、回收率等参数进行了考察，结果表明该方法符合分析要求。本文还采用SephadexG．50凝胶柱层析法，以PBS(pH7．4)为流动相洗脱分离脂质体与游离药物，同时以甲醇破坏脂质体结构，用HPLC法分别测定分离前后的脂质体中的药物的量，计算两种药物的包封率。接着考察了各个处方因素和制备条件对脂质体的包封率和载药量的影响，包括磷脂胆固醇比，药脂比，脂质体内水相的组成、pH和浓度，调节脂

7、质体外水相的碱的类型和最终pH，两种药物比例，以及脂质体孵育的温度和时间。最后筛选出了三个最佳处方。万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要继而考察三个最佳处方脂质体的体外药物释放行为，对比脂质体在不同pH(5．5，6．5，7．4)ff寸PBS下的释放行为。发现随着pH的升高，DOX和CQ的释放速度皆下降，并且药物共载脂质体中，两种药物之间的释放不会相互干扰和影响。以P．gP高表达的耐药细胞MCF．7／ADR和MRPl高表达的耐药细胞HL60／ADR为模型，考察药物共载脂质体的细胞毒性。结果表明，药物共载脂

8、质体对两种细胞的耐药性都有较好的显著的逆转作用，其中DOX和CQ的比是1：：2时，细胞的毒性最大。最后，用流式细胞术检测了细胞摄取行为，激光共聚焦观察药物在细胞内的分布，皆发现了CQ在一定程度上抑制了细胞对DOX的外排。进一步用WesternBlot继续检测了被不同细胞处理过的P—gp和MRPl的蛋白表达量，发现共载药脂质体使得两种耐药蛋白显著减少。综上所述，DOX和CQ共载脂质体对P．gp和MRPl介导的肿瘤细胞耐药性有良好的逆转作用。关