常规病理学技术精品医学ppt课件

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1、病理学技术概论及常规病理技术南方医科大学病理学系申洪课程简介内容：着重介绍重要的病理学技术及其应用目的：提供病理学研究所需的基本技术知识体系和病理学研究的一些基本思路；课程结构：常规病理学技术细胞病理学技术及其在肿瘤病理学中的应用电镜技术及其在病理学中的应用定量病理学技术及其在病理学中的应用基本要求基本概念基本原理基本方法和技术关键联系实际，思考应用一、病理学技术概念范畴1病理学2病理学技术广义概念狭义概念：围绕病理形态学病理形态学技术类型•尸体剖验技术•常规组织病理学技术•常规细胞病理学技术•组织化学和细胞化学技术•免

2、疫组织化学技术流式细胞技术•超微结构技术体视学技术：•定量病理学技术图像分析技术分子病理学技术激光共聚焦显微镜动物实验技术三维重建技术•细胞培养技术一、尸体剖验技术•目的意义：查出病因和病变，明确诊断及死因解释临床症状和体征等临床现象及时发现和确诊新疾病，特别是传染病提供第一手科研材料•法律手续：死者家属签字临床医生签字单位签字•基本要求：研究生：参加病理解剖本科生：见习二常规病理学技术组织取材及固定技术包埋石蜡切片技术冰冻切片技术HE染色标本的来源与收集1、临床活检2、尸体解剖3、实验动物注意事项1、检查申请单的姓名，标

3、本的件数是否与之相符合。2、标本是否符合要求。（一）取材、固定标本的来源与收集1、临床活检2、尸体解剖3、实验动物注意事项1、检查申请单的姓名及标本件数是否相符。2、标本是否符合要求。取材：切取病变组织或拟研究的组织及时，尽可能新鲜迅速固定、冷藏生理盐水、磷酸缓冲液等溶液刀要快，不要挤压组织注意研究目的培养定量对比观察临床诊断固定（一）固定：用化学试剂保持尸体、器官、组织结构和细胞结构的固有形态结构的过程谓固定，所用的化学试剂谓固定剂或固定液。目的：防止自溶、腐败，保持良好结构原理：组织及细胞内蛋白凝固，或使有关成分沉淀、

4、变性，成为不溶性物质。方法：浸泡灌注：局部灌注、全身灌注蒸汽熏蒸固定时间:常规组织病理学:可长时间固定细胞病理学：可长时间固定细胞化学：不宜过长，约1小时为宜固定后处理：充分洗涤固定时间越长，洗涤时间也应相应增加固定注意事项1.固定液有毒性，注意自身防护2.及时，尽可能新鲜3.超微结构观察：低温固定4.注意不同研究目的对固定液的特殊需要细胞化学超微结构细胞涂片巴氏染色5.固定液用量：足，必要时及时更换。6.固定时间7.固定后洗涤常用固定液甲醛溶液：4％甲醛，或10％福尔马林40％甲醛（福尔马林，Formeldehyde）用

5、于无特要求的组织常规固定乙醇（EthylAlcohol）:95%用于细胞病理学涂片常规固定，糖原固定乙醇乙醚混合固定液:95%：95%乙醇+95%乙醚（1:1）用于细胞涂片巴氏染色（二）石蜡包埋制样组织块脱水：逐级乙醇脱水透明：二甲苯浸蜡：65°C包埋：溶解蜡人工脱水程序(适应于3mm厚的组织块)1、30%酒精24h2、50%酒精24h3、70%酒精24h4、80%酒精24h5、90%酒精12h6、95%酒精4h7、95%酒精4h8、100%酒精2h9、100%酒精2h10二甲苯40min11二甲苯40min12石蜡（软）

6、1h13石蜡1h14石蜡1h（三）石蜡切片(四)HE染色：苏木素－伊红染色1脱蜡（二甲苯）2水化（逐级乙醇水化：100％－30％）3染苏木素41％盐酸酒精分化返兰逐级乙醇脱水[30％(或50％)－95％]•伊红染色•逐级乙醇脱水（95％－100％）•二甲苯透明•封片：中性树胶＋盖玻片HE染色法程序三、常规细胞病理学技术•细胞病理学（cytopathology）•诊断细胞学（diagnosticcytology）•临床细胞学（clinicalcytology）。•该学科是利用身体器官组织正常或病变的离体细胞进行涂片，经显微镜

7、观察，做出疾病诊断，特别是肿瘤良恶性诊断.•细胞病理学方法简便易行、诊断准确、可靠，已成为癌症早期诊断的重要手段之一，可广泛应用于临床和大量人群防癌普查。三、常规细胞病理学技术•一、取材、涂片制备痰涂片、胸水、腹水及尿液制片•二、固定三、染色(巴氏染色)常用固定液（1）等量95%乙醇和乙醚混合液（2）氯仿酒精固定液（3）95%酒精固定液（4）福尔马林固定液细胞学研究，固定液选择要根据实验要求条件而定，如用细胞涂片作原位PCR，固定液要选用多聚甲醛。巴氏染色步骤1．标本95％酒精固定3-5分钟2．Harris苏木素液5-10

8、分钟3．水（蒸馏水或自来水）漂洗2-3次4．1％盐酸水溶液（或1％盐酸酒精液）浸1-3次5．自来水浸洗1-2次6．自来水或稀碳酸锂（100ml蒸馏水中加碳酸锂饱和液1滴），涂片返蓝为止7．依次置入70％→80％→95％酒精，各2分钟8．桔黄G6液，1分钟9．95％酒精Ⅰ、Ⅱ缸，各1分钟10．EA36液，