抑制细胞自噬活性对结直肠癌sw480细胞凋亡影响的研究

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1、温州医学院硕士学位论文二、论文摘要抑制细胞自噬活性对结直肠癌SW480细胞凋亡影响的研究中文摘要目的：通过自噬抑制剂联合5一FU对结直肠癌SW480细胞凋亡及自噬活性影响的研究，明确抑制肿瘤细胞自噬活性能否增强结直肠癌细胞在5一FU诱导下的凋亡率，为自噬抑制剂提高结直肠癌化疗敏感性研究提供理论依据和实践基础。方法：l、使用不同浓度5一FU(0，5，10，20，40，80腿／m1)作用于结直肠癌SW480细胞，24h、48h后，CCK-8法检测SW480细胞的存活率，并计算其半数抑制浓度，选用最佳抑制浓度，用

2、于下一步实验。2、挑选处于对数生长期的生长状态良好、存活率高(90％以上)且致密度约为80—90％的SW480细胞，使用含5一FU(浓度为最佳抑制浓度)的10％胎牛血清培养基诱导SW480细胞产生自噬现象并检测：透射电镜检测自噬体的双层或多层膜结构形成，荧光显微镜下观察SW480细胞经MDC染色后自噬泡的形成。诱导并检测结直肠癌SW480细胞自噬现象。3、根据药物处理不同分为对照组、5一FU组(25腿／m1)、3_姒组(5mol／L)、5-FU+3一姒组，相应药物处理24h后，CCK-8检测各组细胞活力，流

3、式细胞仪检测MDC染色后荧光强度变化反应自噬的比率以及各组细胞凋亡情况。最终明确自噬抑制剂3-姒对SW480细胞凋亡的影响。结果：1、SW480细胞受不同浓度5一FU不同作用时间后，肿瘤细胞生长受抑，呈现剂量依赖性，SW480细胞增殖抑制作用随着药物浓度的递增和作用时问的延长而增加。5肛g／ml药物浓度作用24h后细胞增值抑制率为37．5％，作用时间延长至48h抑制率为61．9％；80№／ml药物浓度作用24h后细胞增值抑制率为96．2％，作用时间延长至48h抑制率为98．5％。其半数抑制浓度I％为26．3

4、pg／ml：选用2599／m1浓度5-FU于后期实验。2、25№／ml浓度的5_FU成功诱导SW480细胞产生自噬现象。在5一FU处理后的肠癌细胞，透射电镜检测可见膜泡结构包裹细胞内含物，其中含有变性的胞质成分及被消化降解后形成的产物，有的尚未闭合，可认为是自噬前体；有些细胞呈现凋亡特征。MDC染色5一FU处理后的细胞，可见胞浆内自噬泡呈现明显的点状荧光分布。3、5-FU(25P．g／m1)组平均荧光强度为28．5±5．2；当使用自噬特异性抑制剂3_姒2温州医学院硕士学位论文预处理后，自噬水平下降至接近对照

5、组水平(5-Fu+3—MA组平均荧光强度为11．9±6．6，对照组为12．4±3．5)；3一姒组自噬水平明显减低，平均荧光强度为5．6±1．5。5一FU组对照组比较之间的MDC荧光强度具有显著性差异(P<0．01)；5删组与5一FU+3—MA组比较之间的MDC荧光强度同样具有统计学差异(P

6、18．88％显著增加(P

7、率，自噬抑制剂3-姒能提高SW480细胞对5-FU的敏感性；自噬抑制剂可能是一种有效的治疗结直肠癌的新型药物。关键词：5一氟尿嘧啶细胞自噬结直肠癌SW480细胞细胞凋亡温州医学院硕士学位论文InhibitionofAutophagyActivityEnhancestheEffectofApoptosisinColonCancerCellSW480Abstractobjective：Inthisstudy,theapoptosisandautophagywasinvestigatedincolonCanC．圮

8、l"sw480cellswhichweretreated诵mcombinationof5-FUwinlautophagyinhibitor，tofindoutifthe5-FU-inducedapoptosisincoloncancercellscouldbeenhancedbytheinhibitorofautophagy．Thatcouldbeapromisingstrategyfortheadjuvantc