衰老1型星形胶质细胞自噬与凋亡活性变化的研究

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1、衰老1型星形胶质细胞自噬与凋亡活性变化的研究中文摘要星形胶质细胞是中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)中数目最多，分布最广的神经胶质细胞。根据星形胶质细胞发生分化的“双谱系学说"，可以分为1型星形胶质细胞(type1astrocyte，TIA)和2型星形胶质细胞(type2astrocyte，T2A)两型，体内星形胶质细胞以T1A居多，它行使着星形胶质细胞的大部分功能。随着星形胶质细胞独特生理作用的不断阐明，人们发现星形胶质细胞不仅对神经元起支持作用，还积极参与其功能调控。在中枢神经系统退行性病变过程中，星形胶质细胞起至关重要的作用。因此，

2、探讨T1A生物学特性的改变情况有助于阐明其在神经退行性病变过程中的作用机制，为神经退行性病变的治疗提供新的思路。目的通过体外建立T1A衰老模型，检测衰老TlA部分生物学特性的改变情况，从而探讨衰老T1A在年龄相关的中枢神经系统退行性病变阿尔茨海默病(Alzheimer，sdisease，AD)中的可能作用。方法取新生SD(Sprague-Dawley)大鼠大脑皮质进行混合胶质细胞的原代培养，根据各种胶质细胞黏附能力的差异，运用机械振荡及差速贴壁法分离纯化TlA，继续培养90天即可获得衰老的T1A；以体外培养21天(21DIV)的T1A作为对照组，体外培养90天(90D

3、IV)的T1A作为实验组，免疫细胞化学标记检测实验组与对照组T1A中p-淀粉样蛋白1-40(amyloid—p—protein1-40，A131—40)的表达情况；westernblotting法检测两组细胞内自噬／溶酶体途径相关蛋白微管相关蛋白1A／1B轻链3(microtubule—associatedprotein1A／1B—lightchain3，LC3)及凋亡相关蛋白caspase一3和Bcl．2的表达水平。结果采用振荡培养与差速贴壁法培养出了纯化的T1A，并成功建立T1A衰老模型。免疫细胞化学标记检测发现90DIVT1A表达ADl．40蛋白，而21DIVT

4、1A中Apl．40蛋白标记阴性。westernblotting结果显示，实验组细胞中LC3II蛋白表达水平显著增加，而对照组细胞中未见明显表达，提示了衰老的T1A胞内自噬／溶酶体途径被激活。westernblotting同时还显示，与对照组细胞相比，‘实验组细胞中活化形式的caspase．3蛋白表达明显上调，抗凋亡基因Bcl．2蛋白表达明显下调，提示了衰老的衰老1型星形胶质细胞自噬与凋亡活性变化的研究中文摘要T1A胞内凋亡被启动。结论本研究证实衰老的T1A表达ABl．40，T1A很可能是AD主要病变老年斑中Ap的重要来源。衰老T1A内自噬／溶酶体途径被大量激活，很可能

5、与Ap的表达及降解有关，而此途径的激活在AD过程中的确切作用机制还有待进一步的研究。此外，和AD过程中神经元的改变相似，衰老T1A亦发生凋亡，由此推测，在AD过程中星形胶质细胞不仅表现为反应性增生还存在凋亡的现象，衰老T1A所表达的Ap很可能是其凋亡的始动因素之一。这些发现或许能为星形胶质细胞在年龄相关神经退行性病变过程中的作用研究提供新思路，为此类疾病的临床治疗提供一些实验依据。关键词星形胶质细胞；细胞谱系；衰老；神经退行性病变；13-淀粉样蛋白；凋亡；自噬Il作者：朱云霞指导教师：夏春林教授Changesintheactivityofautophagyandapo

6、ptosisinagedtype1astrocytesAbstractintheactivityofautophagyandapoptosisinagedtype1astrocytesAbstractAstrocytesareglialcells，whicharethelargestinnumbersandwidelydistributiedincentralnervoussystem(CNS)．Accordingtothetheoryofastrocyteslineages，astrocytescailbedividedintotwotypes：type1astro

7、cytes(T1A)andtype2astrocytes(T2A)．T1Aplaymostfunctionsofastrocytesinvivo．Inthepastfewyears，anunprecedentedattentionfocusedonastrocytesasaresultoftheirunusualphysiologicalfunctionthathavebeenfound．Itisknownthat，ratherthanbeingflmeresupporterofneurons，astrocytesareactivelyinvolve