屎肠球菌培养条件的优化及其复合益生菌在猪中饲用效果的研究

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1、安徽农业大学硕士学位论文屎肠球菌培养条件的优化及其复合益生菌在猪中饲用效果的研究姓名：华均超申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：张邦辉；周明2012摘要屎肠球菌T-013是安徽天邦生物研究所保存的一株饲用益生菌，该菌株属人和动物肠道中正常的微生物，能起到促进动物健康生长的作用，在动物养殖中具有很好的应用前景。为推广屎肠球菌T．013的工业化生产和应用，本课题分7个系列试验，对屎肠球菌T-013液态发酵培养基、发酵条件和多菌固态发酵进行了研究，并将屎肠球菌■013复合益生菌应用在母猪、断奶仔猪和生长猪饲料中，以考察其在猪生产中的应用效果。试

2、验1：屎肠球菌T-013发酵培养基的优化。为了实现屎肠球菌T-013在生产中的快速增殖，对培养基成分进行了优化。以培养基各成分对菌体生长的影响作为指标，先采用单因素试验，确定最佳的碳源、氮源和无机盐源，然后采用正交试验设计，对碳氮源和无机盐进行了优化。从而得到屎肠球菌T-013的最佳培养基成分组成是：葡萄糖0．5％，蛋白胨1％，牛肉膏0．3％，氯化钠O．75％，柠檬酸铵0．3％，乙酸钠0．2％。试验2：屎肠球菌T-013．培养条件的优化。为了对屎肠球菌T-013发酵过程中的培养条件进行优化，利用250n1L的三角瓶，通过正交试验L9(37)进行设计，对接

3、种茵龄、培养温度、初始pH值和接种量4因素进行优化。最终得到屎肠球菌T-013的最优培养条件是：接种菌龄16h，培养温度37℃，初始pH值为8．5和接种量是2％．o利用最优条件组合进行验证试验，结果表明在该条件下对屎肠球菌T-013的活菌数含量是3．8×10，cfI妇lL。试验3：屎肠球菌T-013抑菌效果的研究。为了进一步研究屎肠球菌BOl3的抑菌性能以及复合菌种之间的影响，采用牛津杯法进行抑菌试验，以测量抑制圈直径的大小作为试验的主要考察指标。试验结果表明屎肠球菌T-013对大肠杆菌具有很好抑制作用，屎肠球菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌之间无抑制作用。试验

4、4：屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂发酵条件的研究。为了研究屎肠球菌T．013、枯草芽孢杆菌和酵母菌在发酵培养基中的生长情况，采用复合菌种固态发酵法，以总茵数作为检测指标进行试验。结果表明以活菌总数作为目标的最佳条件为：总接种量6％，发酵时间48h，发酵温度37℃，葡萄糖添加量为1％，料水比1：1，菌种比例(屎肠球菌：枯草芽孢杆菌：酵母菌．)2：l：1，原料比例(玉米：豆粕：玉米胚芽粕：大豆皮)1．5：2．5：3：3。试验5：屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂在母猪养殖生产中的应用。为研究添加屎肠球菌T．013等复合益生菌制剂对母猪采食量、仔猪初生重及

5、断奶重等指标的影响。选择胎次和产期相近的经产母猪14头(怀孕85天左右)，分试验组和对照组两组，对照组不添加，试验组添加5％屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂。每个处理组7个重复，每个重复1头母猪，试验期为48天，每天饲喂2次，试验期自由饮水。结果表明：添加5％屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂能使母猪产后7天的采食量显著提高，显著提高仔猪的断奶均重；试验组母猪粪样中菌落总数极显著提高，其中乳酸菌的含量显著提高，大肠杆菌的含量则显著减少。试验6：屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂在断奶仔猪中的应用。为研究基础日粮中屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂的不同

6、添加量对断奶仔猪的生长性能i日粮养分表观消化率、粪便微生物数量、血清指标的影响。选用90头(杜×长×大)体重(5．89士0．59)kg三元杂交断奶仔猪，根据体重、窝别随机分成3组：对照组(无添加)、试验I组(添加3％屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂)、试验II组(添加6％屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂)，每个处理组3个重复，每个重复10头断奶仔猪，记录每周断奶仔猪的体重和耗料量，正试期为21d。结果表明：仔猪日粮中添加屎肠球菌T-013等复合益生菌制剂均能提高日采食量和降低料重比，但结果差异都不显著(P>0．05)，15．21d试验II组显著提高仔

7、猪日增重、减少腹泻率(P<0．05)，其他组之间无显著性差异；试验II组的粗蛋白质和钙的表观消化率显著提高(P<0．05)，其他养分表观消化率差异不显著；试验Il组能极显著降低断奶仔猪粪样的pH值、减少大肠杆菌数量和增加乳酸菌的数量(P<0．01)：试验II组添加6％屎肠球菌T．013等复合益生菌制剂能使血清尿素氮含量极显著低于对照组(P

8、血清指标的影响。选用体重在(31．75士3．78)kg的杜×长×大三元杂交生长猪