th17细胞与graves病的相关研究

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1、河北医科大学硕士学位论文Th17细胞与Graves病的相关研究姓名：周喜娜申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：朱铁年201203中文摘要Thl7细胞与Graves病的相关研究摘要目的：Graves病(GravesdiseasejGD)是一种由于自身免疫导致的器官特异性自身免疫性甲状腺疾病(autoimmunethyroiddisease，AITD)，临床表现为不同程度的弥漫性甲状腺肿、甲状腺毒症、浸润性突眼、胫前粘液性水肿，自身抗体产生、甲状腺组织淋巴细胞浸润是其重要病理特征。但详细的免疫学发病机制尚不清楚。Thl7细胞是一种能产生白细胞

2、介素．17(interleukin．17，IL一17)的新型CD4+T淋巴细胞。IL．17的主要功能是作为一种前炎症细胞因子通过诱导靶细胞产生趋化因子、集落刺激因子(colonystimulatingfactor，CSF)、肿瘤坏死因子Q(tumornecrosisfactorQ，TNF．Q)、IL．6等细胞因子，吸引中性粒白细胞和单核细胞到达炎症部位，促进或扩大炎症反应。已有研究表明，Thl7细胞在类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。GD是典型的自身免疫性甲状腺疾病，其发病机制尚不清楚，本研究拟通

3、过应用流式细胞术分析外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+IL．17+T(Thl7)细胞的数量；应用酶联免疫吸附试验(enzyme．1inkedimmunosorbentassay，ELISA)检测PBMC培养上清中IL．17的水平；应用实时定量(qRT-PCR)检测PBMC中ROR-竹、IFN-小IL．4mRNA的表达量：应用免疫组织化学染色方法检测甲状腺组织中IL．17+细胞的分布及数量变化，旨在探讨Thl7细胞在GD发生中的作用。方法：1研究对象及材料收集30例初发未经过任何治疗的GD患者，诊断标准参照《中国甲状腺疾病诊治指南》(中华医

4、学会内分泌学会，2008年)。将30例年龄、性别相匹配的健康体检者作为正常对照组。免疫组化标本来自6例Graves病患者手术切除的甲状腺和3例创伤死亡的正常甲状腺组织。2方法中文摘要2．1血清TSH、FT3、FT4水平的检测用商用电化学发光法检测初发GD患者和正常对照组的血清中促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone，TSH)、游离甲状腺素(freethyroxine，FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(freetriiodothyronine，FT3)的水平。2．2PBMC中Thl7细胞数量检测采用密度梯度离心法分离新鲜

5、PBMC，经抗人CD3mAb、抗人CD28mAb刺激培养24小时后，取PBMC2x105个，应用流式细胞术检测初发GD患者和正常对照组PBMC中CD4+T细胞和CD4+IL．17+T(Thl7)细胞的数量。2．3PBMC培养上清中IL．17水平检测采用密度梯度离心法分离新鲜PBMC，经抗人CD3mAb、抗人CD28mAb刺激培养24小时后，取上清，用人IL．17ELISA试剂盒检测初发GD患者和正常对照组PBMC培养上清中细胞因子IL．17的水平。2．4PBMC中ROR-yt、IFN吖、IL-4mRNA表达水平提取2．2所述剩余PBMC的mR

6、NA，反转录后，应用qRT-PCR方法检测ROR-yt、IFN-?、IL一4mRNA的相对表达量，以人GAPDH作为内参照基因。2．5甲状腺组织中IL．17+细胞的分布和数量应用免疫组织化学染色方法检测甲状腺组织中IL．17+细胞的分布和数量。2．6统计学分析：应用SPSS13．0统计软件，计量资料以；抽表示，两组间差异用两样本均数的t检验进行比较。两组间采用双变量相关分析进行相关性检验，尸

7、D的诊断标准。2PBMC中Thl7细胞数量变化经抗人CD3mAb、抗人CD28mAb刺激培养24小时后，与正常对照中文摘要组比较，初发GD组外周血PBMC中CD4+IL．17+T(Thl7)细胞占CD4+T细胞的比例(21．95+3．62％)较正常对照组(9．26+5．85％)明显升高(尸

8、。4PBMC中ROR-yt、IFN--y、IL．4mRNA的表达水平初发GD组PBMC经抗人CD3mAb、抗人CD28mAb刺激培养24小时后，ROR-ytmRNA