脊髓水平mtor信号在小鼠神经病理性疼痛中作用机制的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文脊髓水平mTOR信号在小鼠神经病理性疼痛中作用机制的研究姓名：孙晓凤申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：顾小萍2012-04徐州医学院硕士学位论文脊髓水平mToR信号通路在小鼠神经病理性疼痛中作用机制的研究中文摘要目的探讨连续鞘内注射雷帕霉素(R印amycin)对小鼠神经病理性痛行为的影响以及脊髓水平mTOR信号通路在CCI诱发的神经病理性疼痛中的作用机制。方法痛行为学实验：选择鞘内置管成功、无运动障碍及严重体重减轻的成年雄性C57／BL6小鼠48只，随机分为两组：假手术组(sh锄组，n=24)和慢性坐骨神经损伤模型组(CCI组，n-24)

2、。建立模型后将各组随机分为三组，组一不做任何处理，组二在术后1．6d鞘内注射雷帕霉素1斗∥5斗l，组三鞘内给予溶媒20％DMSO5p1(shanl，sh锄+R，sh锄+v，CCI，CCI+R，CCH．V，n=8)。在术前ld，术后ld，3d，5d，7d，10d，14d，17d，2ld，28d检测小鼠双侧足底机械缩足阈值(PawMechanicalWithdrawThreshold，PWMT)和热辐射缩足潜伏期(PawThe肌alWithdrawLatency，PTWL)。分子生物学实验：在未接受药物干预的sh锄组第7d以及CCI术后1d，3d，5d，7d，10d，1

3、4d，17d，2ld，深麻醉状态下以颈椎脱臼的方式处死小鼠，取L4、5节段脊髓保存于一80。C冰箱，待用w色stemblot检测脊髓水平磷酸化mTOR(Ser2448)和总的mTOR的时间依赖的表达量。雷帕霉素干预后，各组于第7d，14d处死小鼠，取L和5节段脊髓保存于．80。C冰箱，待用Westemblot检测脊髓水平mTOR信号蛋白[t—mTOR／p—mTOR，t一4EBP1／p一4EBPl(thr-37／46)，t—p70S6刚p-p70S6k(thr-389)】和PSD95的表达变化，以及待用Co-immunoprecipatation检测PSD95与NR2

4、B，PSD95与G1uA2的相互作用。结果(1)痛行为学变化：与sh锄组相比，CCI组小鼠手术侧足底PTWL和PMwT均明显降低【第7d，PTwL：(7．03士0．71)，(3．26士0．66)s，F=38．27'P<0．05；PMwT：(1．02士0．12)，(0．42士0．12)g，F=51．0l，P<0．05；]。而CCI后1—6d鞘内注射雷帕霉素l“g／5pl，使小鼠的PMWT明显升高[第7d，(0．42土O．18)，(0．86士0．25)g，F=6．56，笙型垦堂堕塑主堂堡垒查尸<0．05]，并且至少持续至术后10d。然而，雷帕霉素对CCI小鼠的热痛觉过敏

5、仅有缓解趋势，没有统计学差异。sham纽和对侧足底痛行为未见明显改变(P>o．05)。(2)分j，生物学结果：与sham组相比，脊髓水平p—mTOR的表达于CCI后ld开始表达增加，第10d达峰值，之后表达下调但2ld时仍处于较高水平。变。与溶媒组相比，而t．mTOR未见明显鞘内注射雷帕霉素组脊髓水平p—mToR，p·4EBPl，p-p70s6KP及PSD95的表达下调，而t．mTOR，t．4EBPl，tIp70S6K表达无明显差异Co-immunoprecipatation结果显示，CCI后PSD95与NR2B以及GluA2的相互作用在7d增加，而PSD95与Gl

6、uA2相互作用的增强持续至第10d。这种相互作用的增强。结论雷帕霉素同样可以抑制CCI诱发的神经病理性疼痛小鼠脊髓水平mTOR信号途径相关蛋白}化形式表达明显增加，鞘内注射mTOR特异性抑制剂雷帕霉素可以抑制各种蛋E的活化并且可有效缓解CcI小鼠的机械痛觉异常。脊髓水平mTOR信号在Cc诱发的持续性疼痛中发挥重要作用。CCI后1．6d鞘内注射雷帕霉素降低了脊髓力平PSD95表达量以及PSD95介导的蛋白相互作用的增强。因此我们推断脊镯mTOR信号通过调控PsD95的表达以及其与谷氨酸受体亚基的相互作用参与CC诱发的神经病理性疼痛的发生与维持。关键词神经病理性疼痛；m

7、TOR信号通路；雷帕霉素：PSD95；NR2B；GluA2；蛋白一蛋白相互作用徐州医学院硕士学位论文ThemechanismstudyofmammaliantargetofrapamycininsDinalcordinneur0DathicDaininducedbVchronicSDlnaIC0rdlnneUropatnlCDalnlnclUCedDVCnronlCconstrictioninjuryinmiceAbstractobjectiVeToinVestigatetlleeffectsofconsecutiVelyintrathecalⅫectionof