体外分析技术ppt培训课件

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1、主讲人/制作人：李芳巍实验核医学Experimentalnuclearmedicine体外分析技术InVitroRadioassay体外分析技术InVitroRadioassay结束一、体外放射分析技术二、非放射免疫分析技术三、临床应用一、体外放射分析的概念和分类体外放射分析二、放射免疫分析（RIA)三、免疫放射分析（IRMA)1、基本原理2、必备条件3、质量控制四、核射线探测相关内容体外放射分析(InVitroRadioassay)1、概念：Definition在体外条件下Invitro以放射性核素标记的配体为示踪剂Tracer以结合反应为基础Base以放射性测

2、量为定量手段Means对微量生物活性物质进行定量分析Quantitativeanalysis一类分析方法的总称。Generalname2、分类：按照抗原－抗体结合反应为基础分为：放射免疫分析Radioimmunoassay;RIA免疫放射分析ImmunoradiometricAssay；IRMA按照是否竞争结合分为：Competivebindinganalysis放射免疫分析、放射受体分析、蛋白质竞争结合分析、放射酶促分析等。Non-competivebindinganalysis免疫放射分析、受体放射分析、酶的放射化学测定、酶的激活剂或抑制剂测定法等。一、竞争性

3、蛋白质结合分析法(CompetitiveProteinBindingAssay；CPBA)本法不需要抗体，用血浆或其他生物组织中存在的特异结合蛋白质作为结合剂对某些物质进行微量分析。方法简便，但其灵敏度较RIA低。二、放射受体分析法(RadioreceptorAssay；RRA)用细胞受体蛋白作为结合剂，根据受体对与其配体(如激素、介质、药物)特异性结合的特点测定配体。本法所测定的值代表配体的生物活性，而不是免疫活性。三、放射酶学分析法(RadioenzymaticAssay；REA)以特异酶作为结合剂。如用蛋白激酶测定环核苷酸。四、放射微生物分析法以特异微生物作

4、为结合剂。如用某种微生物测定叶酸近几年配体结合分析所用的示踪技术，从放射性技术发展到了非放射性技术，形成了非放射性配体结合分析法如：酶免疫分析、荧光免疫分析和化学发光免疫分析CLIA、电化学发光免疫分析ECLIA等。放射免疫分析Radioimmunoassay（RIA)一、基本原理：放射免疫分析是竞争性体外放射分析原理的代表。在体外，以放射性核素标记抗原和非标记抗原，同时与适量的特异性抗体发生的竞争性免疫结合抑制反应。*Ag+Ab       *Ag-Ab+*Ag　　　+　　　Ag　　　  　　　Ag-Ab十AgRIA操作步骤：1、加样2、温浴反应3、分离

5、B/F4、放射性测量5、绘制标准曲线，查找待测物浓度Bindingrate（％）Concentrationofantigen(mol/L)Competiveinhibitioncurve二、必备条件：三大试剂两大方法：标准品抗原standardantigen标记抗原labelednuclide特异性抗体specificantibody分离方法Separationtechnique标准曲线的拟合方式质的要求Qualitativerequest：1。高度纯化2。与标记抗原和待测抗原属同一物质3。与标记抗原同抗体具有相同的亲和能力量的要求Quantitativerequ

6、est：定量精确1、高度纯化2、比活度适当3、良好的免疫活性4、良好的稳定性5、放化纯>95%1、亲和力大affinity2、特异性强specificity3、滴度要高titer1、双抗体法2、PEG法3、DCC法4、固相法1、半对数坐标纸法2、线性回归法3、四/五参数法Bindingrate（％）Concentrationofantigen(mol/L)Competiveinhibitioncurve三、质量控制（QualityControl；QC）质量控制包括监测各重要环节的质量、测定误差和结果的可靠性。（一）、质量控制1．最高结合率(B0％)指不加非标记抗原

7、时标记抗原与抗体的结合率，一般要求在30～50％。2．非特异性结合率(NSB％)指不加抗体时标记抗原与非特异性物质的结合率，一般要求＜5～10％。3．标准曲线直线回归的参数截距a、斜率b和相关系数r是标准曲线的主要质控指标，要求a、b值稳定，r＞0.99。4．ED25、ED50及ED75指标准曲线的结合率在25％、50％及75％时对应的抗原浓度值，它反映标准曲线的稳定性，有助于批间结果的比较。5．反应误差关系(RER)是评价RIA整批误差的综合指标，RER应＜0.04。6．质控图WHO要求在一次实验中，有下列情况之一者，其结果应予舍弃：①三种QCS中有一个测定值＞

8、3SD；②