阴黄证动物模型造模药物的筛选研究

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1、阴黄证动物模型造模药物的筛选研究黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040【摘要】目的：建立一种理想的阴黄证动物模型。方法：通过分析阴黄证的形成机理，采用大黄灌胃的方法，先造成大鼠素体阳虚的背景，再分別以四氯化碳、氨基半乳糖、α■蔡异硫氤酸酯、乙醇诱导大鼠肝损伤。通过对大鼠一般牛物学状态的观察、生化指标、放免指标的综合分析，对以上几种肝损伤造模药物进行筛选，选择最符合阴黄证形成机理的几种造模因素优化组合，从而建立符合阴黄证症候特点的动物模型。结论：选取大黄、乙醇、α■异硫氤酸蔡酯作为阴黄证动物模型的造模药物。【关键词】阴黄证；动物模型；大黄；四氯化碳；

2、氨基半乳糖；α•茶异硫氧酸酯；乙醇【中图分类号】R965.1【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2015)9-0820-02中医学将黄疸分为阳黄与阴黄两大类。但阳黄易识，阴黄难辨。由于没有理想的中医阴黄证动物模型，治疗阴黄证有效药物的研发受到了限制。木研究依据阴黄的成因，在原有寒证模型和肝损伤模型的基础上将造模因素进行优化组合,建立一种符合传统中医学阴黄证病因病机的阴黄证动物模型。1实验材料大黄；四氯化碳(分析纯)；D・氨基半乳糖；α■异硫氧酸蔡酯(ANIT);无水乙醇(分析纯);戊巴比妥钠;橄榄油;AST试剂盒;ALT试剂盒；ALP试剂

3、盒;TBIL试剂盒；DBIL试剂盒；IL・2试剂盒；cAMP试剂盒；cGMP试剂盒。雄性Wistar大鼠/本重180±20go2实验方法2.1大黄供试品溶液的制备取大黄2000已冷水浸泡后煎煮，所得药液为供试液。2.2CCL4的配置与剂量取4ml橄榄油置于容量瓶中，加入2mlCCL4,再加入4ml橄榄油，超声混匀，配制20%的CCL4橄榄油溶液，灌胃剂量为lml/kgo2.3氨基半乳糖的配置与剂量精密称量2.0g氨基半乳糖粉末，溶于20ml生理盐水，超声混匀，配制100g/l的氨基半乳糖溶液。2.4α■蔡异硫氧酸酯(ANIT)橄榄油溶液的配置与剂量

4、3.2gα-^异硫氧酸酯(ANIT)粉末，溶于80ml橄榄油中,作为供试液。2.5乙醇溶液的配置与剂量将等体积无水乙醇溶于等体积纯净水中，配制50%(v/v)乙醇溶液。2.6造模方法50只Wistar大鼠随机分为5组，空白组、大黄四氯化碳组、人黄氨基半乳糖组、大黄α■蔡异硫氧酸酯组、大黄乙醇组。空白组：每天灌胃0.9%生理盐水lml/100g,连续14天。大黃四氯化碳组：每天灌胃给予大黃煎剂1ml/100g连续给药14天。第14天灌胃给予20%的CCL4橄榄油溶液，灌胃剂量为lml/kgo大黄氨基半乳糖组：每天灌胃给予大黄煎剂lml/100g连续给药

5、14天。第14天腹腔注射氨基半乳糖600mg/kgo大黄α-^异硫氧酸酯组：每天灌胃给予大黄煎剂lml/100g连续给药14天。第12天灌胃给予4%ANIT橄榄油溶液150mg/kg,第13天灌胃给予4%ANIT橄榄油溶液50mg/kgo大黃乙醇组：每天灌胃给予大黄煎剂lml/100g连续给药14天。于第10天起每天灌胃给予乙醇50%(v/v)连续5天(5g/kg)o各组动物于第15天称重后取材。2.7数据处理所有数据均以p<0.05判定具有统计学意义。3结果3.1大鼠一般生物学状态观察大鼠灌服犬黄供试液后，出现便澹、蜷缩、倦怠、活动减少等脾阳虚症状。分别

6、给予四氯化碳、D・氨基半乳糖、α■异硫氧酸蔡酯、乙醇后各模型组大鼠均出现毛竖起、拱背、毛发枯而蓬乱不泽的症状。大黄α-异硫氧酸蔡酯组人鼠症状最明显，II排尿明显增多，尿液呈深黄色。3.2血清中IL-2及cAMP/cGMP的测定与正常对照组相比，大黃四氯化碳织、大黄氨基半乳糖组、大黄α-蔡异硫氧酸酯组、大黄乙醇组血清IL・2明显升高，有显著性差异(P<0.01),表明机体免疫功能受到抑制，其中大黄乙醇组血清IL・2升高幅度最大。与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α■蔡异硫氧酸酯组、大黄乙醇组血清cAM

7、P/cGMP值明显降低，有显著性差异(P<0.01),其中大黄乙醇组血清cAMP/cGMP值降低幅度最大3.3血清中AST、ALT、ALP活性的测定与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-蔡异硫氧酸酯组血清AST、ALT>ALP活性明显升高，有显著性差异(P&t;0.01),表明造成了大鼠的肝损伤，其中大黄四氯化碳组血清AST值升高幅度最大，大黃ANIT组血清ALT、ALP值升高幅度最人。3.4血清中DBIL、TBIL含量的测定与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄&alpha